驯鹿狂蝇COI基因分析及驯鹿狂蝇蛆病对宿主机体的影响

论文摘要

驯鹿狂蝇蛆（Cephenemyia trompe）是驯鹿的一个主要寄生虫病病原,感染驯鹿狂蝇蛆病的驯鹿往往消瘦,抗病性差,加上自然环境等因素造成该病呈发展蔓延趋势,每年给我国的驯鹿养殖业带来了很大的经济损失。目前驯鹿狂蝇蛆病的研究已经取得了很大的进步,但是对其种属鉴定、病理变化、免疫机能、内分泌变化、应激能力等还处于空白。所以本次实验针对驯鹿狂蝇同源性、感染后机体的变化等多方面进行研究,为进一步研究和有效消灭驯鹿狂蝇蛆病奠定基础。本实验针对驯鹿狂蝇病原、30头驯鹿狂蝇蛆自然感染驯鹿和30头健康驯鹿进行研究。利用分子生物学手段对驯鹿狂蝇线粒体细胞色素氧化酶COI基因进行深入分析,进行同源性比较,并绘出NJ进化树;对驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿进行了病理剖解,进行了病理组织学观察和超微病理学观察;利用ELISA方法对机体补体系统（C3、C4）进行研究;利用ELISA方法对机体总IgG和特异性IgG进行研究;利用ELISA方法和放射性免疫方法对细胞因子IL-12、IFN-γ和TNF-α进行研究;利用流式细胞仪Annexin V-FITC和PI双染色发对淋巴细胞调亡进行研究;利用放射性免疫法对皮质醇、T3、T4和TSH进行研究;利用分光光度法对NO、SOD、MDA、GSH-Px和T-AOC氧化应激进行研究。结果显示:驯鹿狂蝇成虫和Ⅲ龄幼虫相似性为97%,驯鹿狂蝇和鹿咽狂蝇、驼鹿狂蝇、羊狂蝇、马鼻狂蝇之间相似性为88%;病理组织学和超微病理学观察到鼻粘膜有大量上皮细胞和淋巴细胞脱落,炎症明显;驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿与健康驯鹿之间的总IgG抗体差异显著（P<0.01）,感染组产生了一定的针对幼虫的特异性IgG抗体（OD=0.464±0.128）;驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿体内C3、C4均显著升高（P<0.01）;驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿体内的IL-12、IFN-γ和TNF-α显著低于健康驯鹿（P<0.01）;驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿外周血淋巴细胞调亡率显著高于健康驯鹿（P<0.01）;驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿血清T3、T4显著低于健康驯鹿（P<0.01）,驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿血清TSH显著高于健康驯鹿（P<0.01）,驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿血清皮质醇含量显著高于健康驯鹿（P<0.01）;驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿血清的NO、SOD、GSH-Px和T-AOC均显著低于健康驯鹿（P<0.01）,驯鹿狂蝇蛆感染驯鹿血清的MDA显著高于健康驯鹿（P<0.01）。实验证明了驯鹿狂蝇与其它种属的狂蝇有着不同种属特异性,驯鹿狂蝇蛆对驯鹿机体造成了炎症加剧,免疫力降低,机体的代谢水平下降,抗应激能力下降。进一步证明了驯鹿狂蝇蛆对驯鹿的危害性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 驯鹿狂蝇蛆病综述
• 1.1.1 驯鹿狂蝇蛆病的研究历史
• 1.1.2 驯鹿狂蝇蛆病的病原研究
• 1.1.3 驯鹿狂蝇蛆病的流行病学
• 1.1.4 驯鹿狂蝇蛆病的临床症状和病理变化
• 1.1.5 驯鹿狂蝇蛆病的诊断和防治
• 1.1.6 其他狂蝇科昆虫研究进展
• 1.2 驯鹿狂蝇的相似性研究
• 1.2.1 昆虫种系及鉴定研究
• 1.2.2 线粒体COI 研究
• 1.2.3 进化树研究
• 1.2.4 驯鹿狂蝇相似性研究
• 1.3 补体在寄生虫免疫中的作用
• 1.4 寄生虫病对机体体液免疫影响研究
• 1.4.1 寄生虫获得性免疫研究
• 1.4.2 寄生虫性变态反应
• 1.5 寄生虫病对机体细胞免疫影响研究
• 1.5.1 寄生虫感染及淋巴细胞
• 1.5.2 寄生虫感染与单核巨噬细胞
• 1.5.3 寄生虫感染与嗜酸性粒细胞
• 1.6 寄生虫病对细胞因子影响研究
• 1.6.1 驯鹿狂蝇蛆病与IL-12 的关系
• 1.6.2 寄生虫病与IFN-γ的关系
• 1.6.3 寄生虫病与TNF-α的关系
• 1.7 驯鹿狂蝇蛆病对驯鹿细胞凋亡影响研究
• 1.7.1 细胞凋亡的研究概述
• 1.7.2 寄生虫感染与细胞凋亡的研究进展
• 1.7.3 细胞凋亡的检测手段
• 1.8 驯鹿狂蝇蛆病对驯鹿激素影响研究
• 1.8.1 驯鹿狂蝇蛆病与肾上腺糖皮质激素的关系研究
• 1.8.2 驯鹿狂蝇蛆病与甲状腺素、促甲状腺素的关系研究
• 1.9 驯鹿狂蝇蛆病对驯鹿氧化应激影响研究
• 1.9.1 寄生虫病与一氧化氮（NO）生物学关系
• 1.9.2 寄生虫病与超氧化物歧化酶（SOD）生物学关系
• 1.9.3 寄生虫病与丙二醛（MDA）生物学关系
• 1.9.4 寄生虫病与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的生物学关系
• 1.9.5 驯鹿狂蝇蛆病与总抗氧（T-AOC）的生物学关系
• 1.10 实验创新性研究
• 1.11 实验目的与意义
• 2 实验一 驯鹿狂蝇线粒体COI 分析
• 2.1 材料
• 2.1.1 试剂
• 2.1.2 主要试剂配制
• 2.1.3 实验仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 引物合成与设计
• 2.2.2 样品处理与DNA 提取
• 2.2.3 线粒体COI 基因片断的PCR 扩增
• 2.2.4 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.5 PCR 产物回收
• 2.2.6 回收产物鉴定、测序及序列分析
• 2.2.7 进化树分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳
• 2.3.2 PCR 扩增目的DNA 产物回收
• 2.3.3 线粒体COI 基因片断测序
• 2.3.4 驯鹿狂蝇及相关种属线粒体COI 基因片段序列比较结果
• 2.3.5 进化树分析结果
• 2.4 讨论
• 3 实验二 驯鹿狂蝇蛆病的炎症变化研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 仪器
• 3.2 方法
• 3.2.1 病理检查实验方法
• 3.2.2 血清NO，MDA，SOD，GSH-Px，T-AOC 检测方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 肉眼观察结果
• 3.3.2 病理组织学结果
• 3.3.3 超微病理学结果
• 3.3.4 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清NO 比较结果
• 3.3.5 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清SOD 结果
• 3.3.6 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清MDA 结果
• 3.3.7 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清GSH-Px 结果
• 3.3.8 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清T-AOC 结果
• 3.4 讨论
• 4 实验三 驯鹿狂蝇蛆感染前后体内内分泌变化研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 试剂及配制
• 4.2 方法
• 4.2.1 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清T3 检测方法
• 4.2.2 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清T4 检测方法
• 4.2.3 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清TSH 检测方法
• 4.2.4 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清皮质醇检测方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清T3 结果
• 4.3.2 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清T4 结果
• 4.3.3 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清TSH 结果
• 4.3.4 驯鹿狂蝇蛆感染组与正常组血清皮质醇结果
• 4.4 讨论
• 5 实验四 驯鹿狂蝇蛆感染对宿主机体免疫系统影响研究
• 5.1 材料
• 5.1.1 实验动物
• 5.1.2 试剂
• 5.1.3 仪器
• 5.2 方法
• 5.2.1 特异性IgG 测定方法
• 5.2.2 总IgG 测定方法
• 5.2.3 血清C3 含量测定方法
• 5.2.4 血清C4 含量测定方法
• 5.2.5 血清 IL-12 含量测定方法
• 5.2.6 血清 IFN-γ 含量测定方法
• 5.2.7 血清 TNF-α 含量测定方法
• 5.2.8 外周血淋巴细胞凋亡测定方法
• 5.3 结果
• 5.3.1 特异性 IgG 含量测定结果
• 5.3.2 总 IgG 含量测定结果
• 5.3.3 补体 C3 含量测定结果
• 5.3.4 补体 C4 含量测定结果
• 5.3.5 IL-12 含量测定结果
• 5.3.6 IFN-γ 含量测定结果
• 5.3.7 TNF-α 含量测定结果
• 5.3.8 外周血淋巴细胞凋亡测定结果
• 5.4 讨论
• 6 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介