论文摘要
目的:大鼠在体心肌缺血-再灌注（IR）模型上,观察二氮嗪预处理对减轻IR损伤时的心肌细胞膜连接蛋白Cx43（connexin 43,Cx43）mRNA的相对表达量、磷酸化和非磷酸化蛋白水平及细胞内空间分布的影响;观察PKC特异性抑制剂白屈菜季铵碱对二氮嗪预处理磷酸化和非磷酸化Cx43蛋白水平及细胞内空间分布的影响,以期初步探讨Cx43参与二氮嗪预处理心肌保护作用的可能机制。方法:建立SD大鼠在体心肌IR模型,82只大鼠随机分为5组:假手术组（Sham组,n=10）、缺血再灌注损伤组（IRI组,n=22）、缺血预处理组（IP组,n=22）、二氮嗪预处理组（Dz组,n=22）及二氮嗪预处理+白屈菜季铵碱组（DZ+CH组,n=6）,大鼠缺血（I）30min后再灌注（R）即刻（R 0min）、30min（R30min）、或120（R120min）。以HE染色光镜分析细胞形态结构;全自动生化分析仪检测CK-MB、LDH;TTC染色测量心肌梗死面积;RT-PCR技术检测心肌组织中Cx43mRNA相对表达量;Western Blot方法检测细胞膜总Cx43（TCx43）及非磷酸化Cx43（NCx43）蛋白的相对表达量,并计算磷酸化Cx43（PCx43）蛋白的相对表达量;以免疫荧光化学激光共聚焦扫描显微镜分析Cx43的细胞内空间分布。结果: 1.与IRI组比较,Dz组及IP组显著降低心肌梗死面积和心肌酶学水平（P<0.05）;但Dz组及IP组间无统计学差异。2.与Sham组比较,IRI组缺血区再灌注即刻Cx43mRNA表达水平明显下降,随再灌注时间延长,下降越明显（P<0.05）;IP组及Dz组缺血区Cx43mRNA水平于R0min时均明显下降（P<0.05）,随R时间延长,Cx43mRNA水平均增高（P>0.05）,各时间点缺血区Cx43mRNA水平在IP组及Dz组之间均无明显差异（P>0.05）。3.与Sham组比较,IRI组缺血区R0minTCx43和PCx43表达显著降低（P<0.05）,NCx43表达显著升高（P<0.05）,而IP组及Dz组缺血区R0minTCx43、PCx43及NCx43表达无明显变化（P>0.05）;与IRI组比较,IP组及Dz组缺血区TCx43、PCx43表达于R0min、R30min明显增高（P<0.05）,NCx43表达显著降低（P<0.05）。4.与Sham组比较,R0min时IRI组缺血区细胞膜TCx43荧光强度显著下降、NCx43荧光强度显著增加,IP组及Dz组则无明显改变。IRI组、IP组及Dz组随R时间延长TCx43荧光逐渐增强,NCx43荧光逐渐减弱。与IRI组比较,IP组及Dz组R0min、R30min TCx43荧光明显增强、NCx43荧光减弱,R120min无明显差异。各时间点TCx43及NCx43荧光在IP组及Dz组间无明显差异。5与DZ组R0min比较,白屈菜季铵碱组缺血区TCx43蛋白水平明显下降（P<0.05）,而PCx43、NCx43无明显变化（P>0.05）。结论:1.IP组及Dz组较IRI组显著降低IR损伤;2. IRI组下调大鼠缺血区Cx43mRNA,且随R时间呈下降趋势,于R0min下调TCx43和PCx43,随R时间延长成增高趋势,于R0min上调NCx43,随R时间延长成降低趋势;3.IP组及Dz组上调大鼠缺血区Cx43mRNA及心肌细胞膜TCx43和PCx43蛋白表达量,下调心肌细胞膜NCx43蛋白表达量;3.白屈菜季铵碱可以逆转二氮嗪TCx43蛋白的上调,而对PCx43和NCx43均无明显改变。提示:1 .Cx43可能参与了大鼠二氮嗪早期预处理及IP的心肌保护作用; 2.机制可能与PKC相关。
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标签：大鼠论文; 二氮嗪预处理论文; 激光扫描共聚焦显微镜论文;