中国明对虾幼体对卵黄蛋白的利用研究

论文摘要

本实验首次尝试用选择性沉淀法提纯中国明对虾的卵黄蛋白,并建立了EDTA-MgCl2提纯卵黄蛋白的方法。利用层析法（SephadexG-150,DEAE-Cellulose-52）大量提纯了中国明对虾卵巢中的卵黄蛋白,采用常规免疫方法,以纯化的卵黄蛋白作为抗原来免疫家兔,制备了卵黄蛋白的抗血清。并利用此抗血清进行对虾雌性蛋白的免疫学研究,通过免疫扩散和免疫印迹反应检测了抗血清的特异性。 利用卵黄蛋白抗血清的高特异性,建立了间接竞争酶联免疫吸附反应（ELISA）测定中国明对虾卵黄蛋白的方法。并确立了测定参数:抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1:10000和125ng/mL卵黄蛋白;最适检测范围为10～500ng/mL;批内变异系数为5.0%,批间变异系数为6.2%。 采用ELISA方法测定了中国明对虾卵及无节幼体时期卵黄蛋白含量的变化,卵黄蛋白含量一直呈减少的趋势,N3～4至N5～6期和N5～6至Z1期两个时期卵黄蛋白的消耗量最大,分别为1322ng/mL利1213ng/mL,占卵中卵黄蛋白总量的38.9%和35.7%,Z1期以后体内基本不含卵黄蛋白。 本文测定了中国明对虾无节幼体时期几种消化酶活力。试验结果表明,在中国对虾幼体发育过程中,四种消化酶活力表现出三种变化模式。在幼体发育初期,蛋白酶就具有活力,在N3～4、N5～6时期各个酶活力均有较大幅度的增长,这与中肠腺的分化程度有关。卵黄蛋白的分解吸收与消化酶的活性密切相关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第1章 绪论
• 1.1 研究现状
• 1.1.1 国内外研究进展
• 1.1.2 营养价值
• 1.1.3 生理功能
• 1.2 研究目的
• 1.3 研究意义
• 第2章 卵黄蛋白抗血清的制备
• 2.1 引言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验仪器
• 2.2.3 方法
• 2.3 结果
• 3.3.1 Vn的提纯
• 3.3.2 Vn纯化的鉴定
• 3.3.3 Vn抗血清检测
• 3.3.4 Vn抗体特异性检验
• 2.4 讨论
• 第3章 ELISA测定中国明对虾卵黄蛋白含量方法的建立
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验仪器及试剂
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 抗血清与包被物最佳工作浓度的筛选
• 3.3.2 反应时间对抗原—抗体反应的影响
• 3.3.3 标准曲线的制作
• 3.3.4 精确度
• 3.4 讨论
• 第4章 中国明对虾幼体发育过程中卵黄蛋白含量的测定及其营养研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验仪器及试剂
• 4.2.3 实验方法
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 4.4.1 Vn在中国明对虾幼体发育时期的变化情况
• 4.4.2 Vn对中国明对虾幼体生长的影响
• 4.4.3 Vn的幼体饵料研究
• 第5章 中国明对虾幼体消化酶活力的测定
• 5.1 引言
• 5.2 材料和方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 实验仪器
• 5.2.3 Folin—酚法测蛋白浓度
• 5.2.4 酶活力测定
• 5.3 结果
• 5.3.1 Folin—酚法测蛋白标准曲线
• 5.3.2 消化酶活力
• 5.4 讨论
• 5.4.1 蛋白酶的活性
• 5.4.2 糖酶的活性
• 5.4.3 基因对水解酶的调控
• 第6章 结语
• 参考文献
• 致谢