论文摘要
目的建立局灶性脑缺血模型,从蛋白质整体水平探讨脑缺血/再灌注的保护作用机制。方法雄性、健康大鼠SD,随机分为正常组、脑缺血模型组、茅莓总皂苷干预组和尼莫地平干预组。参照Koizumi法并加以改进,建立MCAO大鼠脑缺血2h再灌注24h的模型;裂解液提取总蛋白质,以双向电泳技术进行蛋白质分离,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,利用专门的软件筛选出差异蛋白质,用MALDI-TOF-MS获得肽指纹图谱,MS-Fit数据库进行搜索,获得有关的蛋白质信息。结果1、以正常大鼠脑组织为研究对象,在不同的条件下进行2-DE,所分离得到的蛋白质点满足质谱分析的要求。2、局灶性脑缺血模型组与正常组脑组织的比较蛋白质组学研究。与模型组比较,从正常组筛选到23个差异表达蛋白斑点,其中13个低表达,10个高表达,鉴定其中6个蛋白质,发现白细胞三烯A-4水解酶、促甲状腺激素释放激素降解胞外酶等与脑缺血相关的蛋白质。3、局灶性脑缺血模型组与茅莓总皂苷干预组的比较蛋白质组学研究。与模型组比较,从茅莓总皂苷干预组从找到了29个差异表达蛋白斑点,其中15个低表达,10个高表达,鉴定其中7个蛋白质,发现TNF-α、LTGF-2等与脑缺血相关的蛋白质。4、局灶性脑缺血模型组与尼莫地平干预组的比较蛋白质组学研究。与模型组比较,从尼莫地平干预组找到了25个差异表达蛋白斑点,其中10个低表达,15个高表达,鉴定其中6个蛋白质,发现激肽原-1前体、谷氨酸受体4前体等与脑缺血相关的蛋白质。结论建立了适用于脑组织的蛋白质组学分析的双向电泳技术,从蛋白质组学角度发现了一些与脑缺血相关的蛋白,有助于今后进一步研究脑缺血性损伤的保护机制。