抑癌基因LKB1在肺癌细胞血管内皮生长因子生成中的作用

论文摘要

众所周知,肿瘤的生长与转移有赖于新生血管的形成,且肿瘤细胞本身在代谢的过程中亦分泌血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）并表达其受体,加速肿瘤新生血管的形成。因此,研究VEGF在肿瘤细胞中的表达及其调控机制对于阐明恶性肿瘤生长及远处转移特性具有重要意义。 STK11/LKB1（serine theronine protein kinase11）基因为1998年从Peutz-Jeghers综合征（黑色素斑-胃肠多发性息肉综合征,PJS）患者中鉴定的抑癌基因。关于抑癌基因在肿瘤细胞VEGF生成中的作用,已有大量的研究报道。已研究证实,抑癌基因p53和PTEN的表达可抑制VEGF的表达。作为一个新发现的抑癌基因,迄今为止,LKB1在肿瘤细胞VEGF生成中的作用,国内外均尚未见报道。先前研究显示,LKB1基因突变可造成胚胎血管发育的异常,且上调胚胎纤维母细胞中VEGF的表达;在原发性肺癌的脑转移标本中,58%的患者出现LKB1基因的杂合型缺失。由此推测,抑癌基因LKB1对肿瘤细胞中VEGF的生成,亦可能存在着一定的调控作用。 为探讨LKB1基因对肿瘤生物学特性的调控作用,我们进行了以下实验研究。首先,观察LKB1在转移性相对较强的肺腺癌组织学来源的A549细胞和转移性相对较弱的大细胞肺癌组织学来源的95C、95D细胞中的表达情况;其次,观察肺癌细胞在获得性表达LKB1后对其VEGF生成的影响;最后,应用RNA干扰技术使肺癌细胞中的LKB1基因表达沉默,观察对其VEGF生成的影响。即本研究旨在揭示抑癌基因LKB1在肺癌细胞VEGF生成中的作用。 首先,以体外培养的A549、95C、95D为研究对象,采用Northern Blot和Western Blot等方法,观察LKB1在其中的表达,并为进一步实验提供基础;其次,以原先LKB1无表达的A549细胞为研究对象,采用基因转染、PCR、菌落PCR、RT-PCR等方法,使其获得性表达LKB1,同时观察其对VEGF生成的影响;最后,以高表达LKB1的95C细胞为研究对象,采用RNA干扰、RT-PCR等方法,沉默LKB1基因表达,同时观察其对VEGF生成的影响。 结果显示,LKB1在肺癌细胞系中的表达呈异质性,其在易转移的肺腺癌组织学来

论文目录

• 英文缩写
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 一、LKB1基因在肺癌细胞系中的表达
• 二、LKB1基因转染对肺癌细胞VEGF生成的作用
• 三、LKB1基因表达沉默对肺癌细胞VEGF生成的作用
• 实验结果
• 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 综述
• 研究生在读期间发表的论文
• 致谢