论文题目: DcR3反义RNA对肝癌的作用及与顺铂协同效应的观察
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 段伟宏
导师: 吴泰璜
关键词: 移植瘤,趋化能力,侵袭力,成瘤时间,凋亡,顺铂,反义,肝癌细胞
文献来源: 山东大学
发表年度: 2005
论文摘要: 段与诱发细胞凋亡有关。作为生物治疗重点部分的诱导凋亡治疗将成为人类征服肝癌的有力手段。 Decoy Receptor 3(DcR3)是1998年Pitti RM首先发现的一种陷阱分子,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,DcR3基因定位于染色体20q13.3上,该基因编码一种无明显跨膜序列的分泌型蛋白,能特异性结合FasL,阻断由Fas/FasL系统介导的细胞凋亡。研究表明,部分人类恶性肿瘤(肺癌、胃癌、肝癌等)中存在DcR3基因过度表达及扩增,而且这种过度表达仅发生于肿瘤细胞,肿瘤周围正常组织则检测不到该基因的表达。后续研究发现,DcR3基因过度表达与肿瘤免疫逃逸及抵抗机体细胞凋亡机制有关。在肿瘤发生发展中起重要作用。目前国际上对该基因研究并不充分,但是鉴于DcR3与肝癌细胞凋亡的密切关联及它在肝癌患者血清中特异地高表达,我们认为DcR3是一个有较高研究价值的基因,明确它在帮助肝癌细胞逃避免疫监视及免疫杀伤中的作用,阻断其表达对肝癌细胞之凋亡有无促进成为我们研究的目标。 第一部分 DcR3反义RNA构建及表达 目的:DcR3(decoy receptor 3)属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,能竞争性地结合LIGHT及FasL,抑制LIGHT及FasL介导的细胞凋亡,使肿瘤细胞逃避免疫监视及免疫杀伤而得以存活。本实验利用反义RNA技术观察在DcR3基因片段与其反义DcR3基因片段结合后,凋亡有无增加?与传统化疗药顺铂比较,何者促凋亡效应更强?二者是否具有协同效应?为此,第一部分实验首先构建DcR3反义RNA,将其转染肿瘤细胞,比较其表达情况。方法:从新鲜肝癌细胞中提取总RNA,在DcR3基因序列引物限制下进行RT-PCR反应,得到大量DcR3的DNA片段,将该基因片段进行电泳鉴定并做基因测序分析,确定之后对其进行BamH Ⅰ、Xhol Ⅰ双酶切,使DcR3片段粘性末端裸露;同时对质粒PVAX Ⅰ(一)进行BamH Ⅰ、Xhol Ⅰ双酶切;将此具有粘性末端的二者在T4DNA连接酶的作用下进行反义连接,得到PVAX Ⅰ-as-DcR3,将其转染肝癌细胞株SMMC-7721,之后以β-actin为内参照,用Western Blot方法检测单纯肝癌细胞株SMMC-7721组、转染了PVAX Ⅰ-as-DcR3的肝癌细胞株SMMC-7721组、转染了空质粒PVAX Ⅰ的肝癌细胞株SMMC-7721组,比较三组蛋白表达量有无差别。结果:对DcR3基因片段进行电泳鉴定,证实在620bp处有一条符合预期结果的电泳条
论文目录:
引言
中文摘要
英文摘要
英文缩写说明
论文一 DcR3反义RNA构建及表达
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
论文二 DcR3反义RNA对肝癌细胞凋亡的影响及与顺铂协同作用观察
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
论文三 DcR3反义RNA对裸鼠移植瘤体内实验研究
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的论文情况
发布时间: 2005-10-17
参考文献
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