猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎三联灭活疫苗的研制

论文摘要

病毒性传染病是诱发母猪繁殖障碍性疾病的主要因素之一,其中猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎等均可导致妊娠母猪流产,产死胎、木乃伊胎,本研究旨在从生产实际出发,探讨制备一种针对这三种猪繁殖障碍性疾病的多联灭活疫苗,拟达到简化免疫程序、降低免疫成本、减小免疫刺激,起到一针防多病的临床应用效果。疫苗的研制及检验结果如下：1.三联灭活疫苗的制备通过在传代细胞上接毒,收获TCID50为10-6.5/0.1mL的猪伪狂犬病毒液8000mL,HA为29细小病毒液8000mL,将病毒液灭活后分别通过透析和超滤这两种不同的方法进行浓缩,再与稀释过的乙型脑炎病毒液等体积混合,将混合后的病毒液与一定比例的佐剂混匀,通过组织捣碎机和胶体磨两种不同的乳化设备进行乳化,共试制了猪伪狂犬病、细小病毒病和乙型脑炎三联油乳剂灭活疫苗2个批次,一个批次为1000mL,另一个为3000mL。2.三联灭活疫苗的检验对试制疫苗进行物理性状及细菌检验均符合疫苗检验要求。将试制疫苗接种妊娠母猪、后备母猪及Balb/C小鼠,接种后试验动物采食生长正常,无异常反应,妊娠母猪无流产、产死胎和木乃伊胎的记录。将试制三联灭活疫苗进行Balb/C小鼠的免疫与效力保护性试验,小鼠在二免后21d,PRV平均中和抗体指数达到1:28.5,用105.0TCID50的猪伪狂犬强毒足垫部位攻击小鼠,疫苗对小鼠保护率达到90%；用试制三联灭活疫苗进行KM小白鼠的免疫与效力保护性试验,二次免疫后21d用105.84PFU的P3株强毒对小鼠进行腹腔攻毒,疫苗对小鼠的保护率达到80%；用试制的三联灭活疫苗免疫豚鼠,二次免疫后10周,豚鼠的PPV HI抗体水平仍然维持在1：210以上。3.三联灭活疫苗对猪的免疫原性试验将试制三联灭活疫苗免疫6月龄的后备母猪发现,产生的猪伪狂犬病毒ELISA抗体平均水平和猪伪狂犬病毒单价灭活疫苗所产生的抗体水平相当；三联灭活疫苗产生的细小病毒HI抗体水平要高于猪细小病毒灭活疫苗；猪乙型脑炎病毒的ELISA抗体水平低于猪乙型脑炎弱毒疫苗。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词（ABBREVLATION）
• 1 文献综述
• 1.1 猪伪狂犬病及其疫苗的研究概况
• 1.1.1 猪伪狂犬病概述
• 1.1.2 猪伪狂犬病的在我国的流行现状
• 1.1.3 猪伪狂犬病疫苗在我国的研究及应用状况
• 1.2 猪乙型脑炎及其疫苗的研究概况
• 1.2.1 乙型脑炎概述
• 1.2.2 猪乙型脑炎在我国的流行现状
• 1.2.3 猪乙型脑炎疫苗在我国的研究及应用状况
• 1.3 猪细小病毒病及其疫苗的研究概况
• 1.3.1 猪细小病毒病概述
• 1.3.2 猪细小病毒病在我国的流行现状
• 1.3.3 猪细小病毒疫苗在我国的研究及应用状况
• 1.4 多联疫苗的研究及应用概况
• 1.4.1 多联疫苗概述
• 1.4.2 多联灭活疫苗的研究及应用状况
• 1.4.3 多联弱毒疫苗的研究及应用状况
• 1.4.4 多价基因工程疫苗的研究及应用状况
• 2 研究的目的和意义
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.1.1 病毒毒株、细胞和疫苗
• 3.1.2 主要试剂和器材
• 3.1.3 主要培养基及试剂的配制
• 3.1.4 实验动物
• 3.1.5 主要大型设备
• 3.2 方法
• 3.2.1 疫苗的制备
• 3.2.2 疫苗的检验
• 3.2.3 疫苗对猪的安全性试验
• 3.2.4 疫苗对猪的免疫原性试验
• 4 结果与分析
• 4.1 疫苗的制备
• 4.1.1 猪伪狂犬和细小病毒液的制备
• 4.1.2 猪伪狂犬和细小病毒液毒价的测定
• 4.1.3 猪伪狂犬和细小病毒液的灭活及检验
• 4.1.4 疫苗的配制
• 4.1.5 疫苗的乳化
• 4.2 疫苗的检验
• 4.2.1 疫苗的物理性状检验
• 4.2.2 疫苗的细菌及致细胞病变检验
• 4.2.3 疫苗的安全性检验
• 4.2.4 疫苗的效力检验
• 4.3 疫苗对猪的安全性试验
• 4.3.1 疫苗对后备母猪安全性试验
• 4.3.2 疫苗对妊娠母猪安全性试验
• 4.4 疫苗对猪的免疫原性试验
• 4.4.1 三联灭活疫苗免疫猪后伪狂犬病毒抗体的消长规律
• 4.4.2 三联灭活疫苗免疫猪后乙型脑炎病毒抗体的消长规律
• 4.4.3 三联灭活疫苗免疫猪后细小病毒抗体的消长规律
• 4.4.4 三联灭活疫苗对猪的免疫原性试验结果分析
• 5 讨论
• 5.1 病毒液浓缩讨论
• 5.2 病毒液乳化讨论
• 5.3 疫苗免疫原性讨论
• 5.4 疫苗的不足与改进
• 6 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢