乳腺癌血管/淋巴管新生与HER-2相关性及预后意义的研究

论文摘要

目的：研究血管／淋巴管新生与HER-2基因的相互关系及在乳腺癌发生发展中的作用和对乳腺癌预后的影响，以期探讨HER-2过表达患者预后差的分子机制，为乳腺癌淋巴结转移和预后评估提供新的分子指标，为HER-2过表达患者的临床治疗提供新的思路和理论依据。 方法：（1）选取两株HER-2表达水平不同的乳腺癌细胞株（SKBR-3、MDA-MB-231），用Herceptin药物干预阻断HER-2蛋白功能，采用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，Real time qRT-PCR）（相对定量法）和免疫组化法（Immunohistochemistry，IHC）检测Herceptin阻断前后VEGF-A，-C，-D mRNA及细胞爬片中三因子蛋白表达水平。（2）收集1993～1996年61例乳腺浸润性导管癌和29例乳腺良性病变新鲜标本，采用real time qRT-PCR（绝对定量法）检测VEGF-A，-C，-D mRNA表达水平，分析这三种因子mRNA表达与乳腺癌临床病理参数及预后间关系。（3）收集1992～1996年有随访资料的160例乳腺癌石蜡包埋组织，通过免疫组化方法检测血管／淋巴管新生相关指标：VEGF-A，-C，-D蛋白表达，并用FⅧ、podoplanin抗体分别标记微血管、微淋巴管内皮，计数微血管密度（microvessel density，MVD）和淋巴管密度（lymphatic vessel density，LVD），并观察肿瘤组织中微血管侵犯（microvessel invasion，MVI）和淋巴管侵犯（lymphatic vessel invasion，LVI）情况，将以上指标与患者的临床病理参数进行统计分析。（4）显色原位杂交法（Chromogenic in situ hybridization，CISH）和免疫组化法分别检测乳腺癌组织中HER-2基因和蛋白表达状况，分析其与乳腺癌血管／淋巴管新生相关指标间关系，采用logistic回归模型将所有指标与淋巴结转移进行多因素分析，并同时进行单因素和多因素生存分析（cox风险比例模型）。 结果：（1）Herceptin阻断后SKBR-3细胞VEGF-A，-C，-D基因mRNA含量是阻断前的0.247、0.519、0.930倍。Herceptin阻断前SKBR-3细胞VEGF-A，-C免疫组化染色为强阳性，VEGF-D为弱阳性表达；阻断后VEGF-A，-C降低为中度阳性表达，VEGF-D无明显改变仍为弱阳性表达。Herceptin阻断后对照组MDA-MB-231细胞VEGF-A，-C，-D mRNA及蛋白表达均无明显改变。（2）人乳腺癌VEGF-A，-C mRNA表达量（4.19，4.29）分别高于乳腺良性病变（2.24，3.69），两组间有显著性差异（P＜0.01），乳腺癌中VEGF-D mRNA阳性表达率（73.77％）高于良性组织（51.72％）（P＜0.05）。人乳腺癌中VEGF-A，-C，-D蛋白过表达率分别为54.4％、56.3％、47.5％，而癌旁良性乳腺组织多为低或弱阳性表达。三因子mRNA表达及蛋白表达与患者临床病理参数包括患者年龄、肿块大小、组织学分级、淋巴结转移等均无明显关系（P＞0.05）。（3）VEGF-A蛋白表达与MVD显著正相关（r=0.268，P＜0.01），VEGF-C蛋白表达与LVD显著正相关（r=0.248，P＜0.01）；MVD与肿块大小、LVD与淋巴结转移和TNM分期有关（P＜0.05）。（4）HER-2基因扩增、蛋白过表达与VEGF-A，-C蛋白过表达正相关（r=0.205，r=0.253，r=0.203，r=0.215，P＜0.05）；HER-2蛋白表达与VEGF-D蛋白表达正相关（r=0.184，P＜0.05），但基因扩增与其并无相关性（r=0.132，P＞0.05）。HER-2基因与MVD、MVI、LVD、LVI无关（P＞0.05）。（5）单因素分析显示淋巴结转移组HER-2基因扩增率、蛋白过表达率高于淋巴结未转移组（P单＜0.05）；单、多因素分析均显示LVD和LVI与淋巴结转移相关（P单＜0.05，P多＜0.05），VEGF-D／VEGF-C mRNA表达量的比值在淋巴结转移组（0.93）低于未转移组（1.58），与淋巴结转移呈负相关（P单＜0.05，P多＜0.1）。（6）单因素生存分析显示HER-2基因扩增、蛋白过表达、VEGF-A，-CmRNA高表达、VEGF-A，-C蛋白过表达、高MVD、高LVD、MVI和LVI均与患者低无病生存率相关（P单＜0.05）。VEGF-D mRNA阳性率和蛋白表达与患者无病生存率无关（P单＞0.05）。多因素生存分析显示：除TNM分期、淋巴结转移外，只有LVI是乳腺癌独立的预后影响因子（P多＜0.05）。 结论：（1）VEGF-A，-C，-D过表达是人原发性乳腺癌中普遍存在的现象，它们共同参与乳腺癌的发生发展。VEGF-A是血管新生重要的调控因子，VEGF-C是淋巴管新生重要的调控因子。（2）VEGF-D／VEGF-C mRNA比值、LVD和LVI是乳腺癌患者淋巴结转移的新的重要预测因子，VEGF-C和VEGF-D可能存在相互拮抗作用。（3）血管／淋巴管新生相关指标（VEGF-A，-C表达、MVD、LVD、MVI、LVI）均影响患者预后，但仅LVI是独立的预后影响因子，它较其他指标判断乳腺癌预后更有意义。（4）SKBR-3乳腺癌细胞株中HER-2基因调控VEGF-A，-C表达，而对VEGF-D基因表达无影响。人乳腺癌中HER-2通过调控VEGF-A，-C表达，促进血管／淋巴管新生，影响肿瘤的增殖和转移，HER-2介导的血管／淋巴管新生是乳腺癌HER-2过表达患者预后差的重要分子机制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 乳腺癌细胞株中 HER-2 基因与 VEGF-A,-C,-D调控关系的研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 乳腺癌血管/淋巴管新生与 HER-2 相关性及预后意义的研究
• 第一章 乳腺癌血管内皮生长因子-A,-C,-D mRNA 表达及预后意义的研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二章 血管/淋巴管新生相关指标间关系及在乳腺癌发生发展中作用研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三章 乳腺癌血管/淋巴管新生与 HER-2 间相关性研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录一: 文献综述
• 附录二: 中国人胃癌中 HER-2/neu 基因扩增和蛋白表达的相关性研究
• 附录三: 攻读博士学位期间发表及待发表的论文题录
• 英文缩略词表
• 致谢