本文主要研究内容
作者张文静,陈海超,郭利建,刘香利,赵惠贤（2019）在《小麦TaWTG1的原核表达、纯化及去泛素化酶活性分析》一文中研究指出：去泛素化酶是泛素化途径的逆调节酶,参与调控蛋白质的降解。为了探索小麦(Triticum aestivum)去泛素化酶家族成员WTG1 (wide and thick grain 1)基因的功能,本研究利用生物信息学方法对小麦TaWTG1编码蛋白的理化性质和结构进行了分析;进一步构建其原核表达载体p ET28a-TaWTG1,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株BL21(DE3),对重组蛋白His-TaWTG1诱导表达条件(包括培养温度,异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)浓度和诱导时间)进行优化;进一步对重组蛋白进行可溶性分析和镍柱分离纯化,并对其去泛素化活性进行体外验证。结果表明,TaWTG1蛋白由319个氨基酸组成,理论分子量为35.38 kD,等电点为4.62;其三级结构主要由α螺旋构成,含有OTU (ovarian tumor-related proteases)相关蛋白酶家族的otubain保守结构域;重组蛋白His-TaWTG1的最佳诱导表达条件为0.4 mmol/L IPTG、28℃诱导6 h;该重组蛋白主要以可溶形式存在于上清液中。Western blot分析确定用镍柱分离纯化获得的重组蛋白为目的蛋白;体外活性分析实验表明,TaWTG1具有去泛素化酶活性,可以切割赖氨酸(K)48和K63连接的四聚泛素链。本研究为TaWTG1基因功能研究提供了基础资料。
Abstract
qu fan su hua mei shi fan su hua tu jing de ni diao jie mei ,can yu diao kong dan bai zhi de jiang jie 。wei le tan suo xiao mai (Triticum aestivum)qu fan su hua mei jia zu cheng yuan WTG1 (wide and thick grain 1)ji yin de gong neng ,ben yan jiu li yong sheng wu xin xi xue fang fa dui xiao mai TaWTG1bian ma dan bai de li hua xing zhi he jie gou jin hang le fen xi ;jin yi bu gou jian ji yuan he biao da zai ti p ET28a-TaWTG1,bing zhuai hua da chang gan jun (Escherichia coli)biao da jun zhu BL21(DE3),dui chong zu dan bai His-TaWTG1you dao biao da tiao jian (bao gua pei yang wen du ,yi bing ji liu dai ban ru tang gan (isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)nong du he you dao shi jian )jin hang you hua ;jin yi bu dui chong zu dan bai jin hang ke rong xing fen xi he nie zhu fen li chun hua ,bing dui ji qu fan su hua huo xing jin hang ti wai yan zheng 。jie guo biao ming ,TaWTG1dan bai you 319ge an ji suan zu cheng ,li lun fen zi liang wei 35.38 kD,deng dian dian wei 4.62;ji san ji jie gou zhu yao you αluo xuan gou cheng ,han you OTU (ovarian tumor-related proteases)xiang guan dan bai mei jia zu de otubainbao shou jie gou yu ;chong zu dan bai His-TaWTG1de zui jia you dao biao da tiao jian wei 0.4 mmol/L IPTG、28℃you dao 6 h;gai chong zu dan bai zhu yao yi ke rong xing shi cun zai yu shang qing ye zhong 。Western blotfen xi que ding yong nie zhu fen li chun hua huo de de chong zu dan bai wei mu de dan bai ;ti wai huo xing fen xi shi yan biao ming ,TaWTG1ju you qu fan su hua mei huo xing ,ke yi qie ge lai an suan (K)48he K63lian jie de si ju fan su lian 。ben yan jiu wei TaWTG1ji yin gong neng yan jiu di gong le ji chu zi liao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自农业生物技术学报的张文静,陈海超,郭利建,刘香利,赵惠贤，发表于刊物农业生物技术学报2019年10期论文，是一篇关于小麦论文,原核表达论文,纯化论文,去泛素化酶活性论文,农业生物技术学报2019年10期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自农业生物技术学报2019年10期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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