创伤性脑损伤组织乙酰胆碱酯酶的变化及药物干预效应

论文摘要

无论是发达国家,还是发展中国家,闭合性脑损伤都是造成45岁以下青年病人死亡和出现神经损害的主要原因。在过去的几十年中,尽管相关的研究和神经监护取得了一些进展,但严重脑损伤病人的预后仍然很差,死亡率高达35—40%。过去关注的焦点是创伤后脑皮质的损害导致颅内高压,并进一步发生继发性损伤。对此,也采取了许多治疗措施以恢复损伤组织的功能。但颅内高压仍然是导致闭合性脑损伤病人死亡的重要原因。继发于创伤的进一步损伤可导致神经炎症反应。前炎性细胞因子,如白介素和肿瘤坏死因子,趋动素以及补体参与的过敏毒素反应,是继发性神经炎症反应的关键介导因素。 乙酰胆碱酯酶是神经系统的重要水解酶,其主要功能是水解突触及神经肌肉接头处的神经介质乙酰胆碱,维持神经系统功能的稳定。乙酰胆碱酯酶因其来源不同,其氨基酸顺序及空间结构也存在一定差异。单克隆抗体是以杂交瘤技术制备的特异性识别某一抗原决定簇的抗体,可用作蛋白质特异性检测的工具。 本研究中,为观察损伤所致脑组织肿瘤坏死因子和乙酰胆碱酯酶的变化,首先以亲和层析技术分离纯化了电鳐乙酰胆碱酯酶。以其为抗原制备了抗乙酰胆碱酯酶的单克隆抗体,并且以天然和还原并烷基化的乙酰胆碱酯酶进行了筛选。研究观察了单克隆抗体2E6与不同来源乙酰胆碱酯酶(包括大鼠及小鼠脑乙酰胆碱酯酶,大鼠及小鼠红细胞乙酰胆碱酯酶和大鼠及小鼠血浆丁酰胆碱酯酶)的交叉免疫反应。 结果显示,单克隆抗体2E6既可与天然乙酰胆碱酯酶反应,又可与还原烷基化的乙酰胆碱酯酶反应。但其只能与来源于大鼠及小鼠脑组织的乙酰胆碱酯酶反应,不与来源于大鼠及小鼠红细胞的乙酰胆碱酯酶及来源于血浆的丁酰胆碱酯酶反应。 以小鼠建立闭合性脑损伤模型,测定脑组织含水量及TNF和乙酰胆碱酯酶水平。结果显示,创伤性脑损伤发生后,脑组织出现水肿的同时,TNF及乙酰胆碱酯酶水平升高。抗炎药物地塞米松及七叶皂苷的改构化合物—七叶皂苷精氨酸对水肿的形成和TNF及乙酰胆碱酯酶水平的升高具有明显的抑制作用。但常用的甘露醇只能减轻脑水肿,而对TNF和乙酰胆碱酯酶水平无明显影响。 综合以上结果,甾体类抗炎药物及来源于植物的七叶皂苷既能减轻水肿,又能抑制继发性炎症损伤,另外也可通过调节乙酰胆碱酯酶的水平改变参与学习、记忆的乙酰胆碱的含量。因此,为降低闭合性脑损伤病人的死亡率和预防创伤后痴呆,创伤后应用强效抗炎药物是十分必要的。

论文目录

• 引言
• 第一章 特异性识别神经系统乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的分离纯化及鉴定
• 一、电鳐电器官AChE的纯化及活性测定
• 1 材料
• 2 方法及结果
• 二、乙酰胆碱酯酶单克隆抗体纯化及特异性识别神经系统胆碱酯酶抗体的筛选
• 1 材料
• 2 方法及结果
• （1）、抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的纯化
• （2）、抗乙酰胆碱酯酶单克隆2E6对酶活性的影响
• （3）、乙酰胆碱酯酶单克隆抗体2E6的交叉反应性
• 1)、还原并烷基化乙酰胆碱酯酶的制备
• 2)、单克隆抗体与天然及还原并烷基化乙酰胆碱酯酶的反应
• 3)、特异性识别神经系统胆碱酯酶抗体的确定
• 第二章 创伤性脑水肿动物模型的建立及药物的干预作用
• 一、创伤性脑水肿动物模型的建立
• 1 材料
• 2 方法及结果
• 二、药物对创伤性脑水肿的干预与脑乙酰胆碱酯酶的变化
• 1 材料
• 2 方法及结果
• 2.1 创伤性脑水肿形成不同时间（6h、12h）药物的影响及脑乙酰胆碱酯酶的变化
• 2.2 小鼠创伤性脑水肿后脑组织乙酰胆碱酯酶的测定
• 2.3 小鼠创伤性脑水肿后脑组织中TNF测定
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 学位论文独创性声明