鸡垂体特异性转录因子（Pit-1）多态性与屠宰性状的相关分析

论文摘要

催乳素（Prolactin.PRL）、生长激素（Growth Hormone.GH）、促甲状腺素β（Thyroid-stimulating Hormone-β.TSH-β）是家禽垂体前叶分泌的具有重要生理功能的激素,这些激素可以调控家禽产蛋的发生与维持、生长发育、免疫应答等生理功能。而垂体特异性转录因子（Pituitary specific transcription factor 1,Pit-1）能够调控生长激素（GH）、促甲状腺素β（TSH-β）和催乳素（PRL）基因的表达,从而在分子水平上影响家禽的产蛋性能、生长速度、脂肪沉积以及免疫力。本研究通过分子生物学手段,寻找中国地方鸡Pit-1基因序列中的多态位点,并探讨该位点的多态性与活体重、屠体重、胸肌重、腿肌重、半净膛重、全净膛重、腹脂重、屠宰率、胸肌率、腿肌率、半净膛率、全净膛率以及腹脂率等屠宰性状间是否存在相关性,为后续深入研究提供理论依据。本研究选用草科鸡（CK）、山地乌骨鸡（SD）、封开杏花鸡（T）、惠阳胡须鸡（H）、清远麻鸡（Q）和霞烟鸡（S）等6个中国地方鸡种共166只个体为研究对象,应用PCR-RFLP技术,利用5对引物,有目的性的扩增了该基因的内含子1、3、4部分片段,研究结果如下:应用PCR-RFLP技术,利用引物P1,在山地乌骨鸡（SD）、封开杏花鸡（T）、惠阳胡须鸡（H）、清远麻鸡（Q）和霞烟鸡（S）等5个地方鸡种的内含子1中发现了一个突变位点,序列测定表明该位点的单核苷酸由C突变为T。显著性检验表明该位点的突变除对腿肌重（LW）、腹脂重（AW）、屠宰率（CP）、半净膛率（HP）、全净膛率（EP）无显著影响（P＞0.05）外,对其它性状均有显著影响（P＜0.05）。在封开杏花鸡（T）和霞烟鸡（S）的内含子3中发现了一个位于230bp处的C→T碱基突变位点。该突变同样没有改变氨基酸的编码序列,而显著性检验表明该突变对活体重（OW）、屠体重（CW）、半净膛重（HW）、全净膛重（EW）、胸肌率（BP）、腿肌率（LP）、半净膛率（HP）、全净膛率（EP）等有显著影响（P＜0.05）。对腿肌重（LW）、胸肌重（BW）、腹脂重（AW）、屠宰率（CP）、腹脂率（AP）等无显著影响（P＞0.05）。在封开杏花鸡（T）、惠阳胡须鸡（H）、清远麻鸡（Q）和霞烟鸡（S）等4个鸡种的内含子4中发现了一个位于102bp处的G→C突变。显著性检验表明该突变除了对腹脂重、屠宰率、半净膛率影响不显著外（P＞0.05）,对其它屠宰性状均存在显著影响（P＜0.05）。通过所发现的3个SNP位点出现的8种单倍型进行分析发现,频率大于10%的有3种,分别是H2（GEF）、H6（HEF）和H8（HTF）型。经过单倍型组合与屠体性状相关性分析发现,H1H1基因型对活重、屠体重、半净膛重、全净膛重有显著影响;H1H2和H1H6基因型对腿肌率有显著影响;H1H5基因型对全净膛率有显著影响;H1H4基因型对屠体重、腿肌重、胸肌重、腿肌率有显著影响。由本研究可知,可以进一步在其它家禽地方品种或培育品种中检验内含子1中的C→T突变、内含子3中的C→T和内含子4中的G→C突变,作为一个分子标记用于屠宰性状的标记辅助选择,应用到家禽育种实践中,为提高家禽的生产性能和改良肉用品质提供理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 Pit-1（Pituitary specific transcription factor 1）基因的概述
• 1.1.1 Pit-i基因的发现
• 1.1.2 Pit-1蛋白结构及功能
• 1.1.3 鸡Pit-1基因的结构
• 1.2 不同物种间Pit-1基因序列的比较
• 1.3 Pit-1基因的表达部位及形式
• 1.4 Pit-1基因的作用机制
• 1.5 Pit-1蛋白在垂体前叶激素基因表达中的作用
• 1.6 Pit-1基因多态性研究现状
• 1.6.1 Pit-1基因多态性在人上的研究
• 1.6.2 Pit-1基因多态性在猪上的研究
• 1.6.3 Pit-1基因多态性在牛上的研究
• 1.6.4 Pit-1基因多态性在鸡上的研究
• 1.6.5 PCR-RFLP技术
• 1.7 本研究的目的和意义
• 2 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试样本
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要试剂及配制
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 技术路线
• 2.2.2 基因组DNA提取（萨姆布鲁克,1995）
• 2.2.3 PCR反应及目的产物检测
• 2.2.4 PCR-RFLP内切酶种类和反应体系
• 2.2.5 PCR-RFLP酶切处理及基因型判定
• 2.3 数据统计分析
• 2.3.1 目标生产性状的测定与数据收集
• 2.3.2 基因频率和基因型频率的计算
• 2.3.3 Hardy-Weinberg平衡状态的检验
• 2.3.4 基因型与鸡的生产性能的相关分析
• 2.3.5 核苷酸序列分析
• 2.3.6 复合位点的遗传效应分析
• 3 结果与分析
• 3.1 模板DNA的抽提结果
• 3.2 鸡Pit-1基因PCR扩增结果
• 3.2.1 鸡Pit-1基因引物1的扩增结果
• 3.2.2 鸡Pit-1基因引物2的扩增结果
• 3.2.3 鸡Pit-1基因引物3的扩增结果
• 3.2.4 鸡Pit-1基因引物4的扩增结果
• 3.2.5 鸡Pit-1基因引物5的扩增结果
• 3.3 酶切反应结果
• 3.3.1 PCR-RFLP-EcoT221酶切产物结果
• 3.3.2 PCR-RFLP-FbaⅠ酶切产物结果
• 3.3.3 PCR-RFLP-EcoRⅤ酶切产物结果
• 3.3.4 PCR-RFLP-EcoRⅠ酶切产物结果
• 3.3.5 PCR-RFLP-HaeⅢ酶切产物结果
• 3.3.6 鸡Pit-1基因各多态位点测序结果
• 3.4 鸡Pit-1基因遗传多态性的分析
• 3.4.1 鸡Pit-1基因PCR-RFLP-EcoT221酶切基因型在不同品种的频率分布
• 3.4.2 鸡Pit-1基因PCR-RFLP-FbaⅠ酶切基因型在不同品种的频率分布
• 3.4.3 鸡Pit-1基因PCR-RFLP-EcoR Ⅰ酶切基因型在不同品种的频率分布
• 3.5 鸡Pit-1基因多态性位点的遗传效应分析
• 3.5.1 各品种鸡屠宰性状的分析比较
• 3.5.2 鸡Pit-1基因酶切不同基因型对屠宰性状的遗传效应分析
• 3.6 鸡Pit-1基因酶切各SNP位点对屠宰性状的遗传效应分析
• 3.6.1 三个SNP位点单倍型组合及其频率
• 3.6.2 三个SNP位点单倍型组合与屠宰性状相关性分析
• 4 讨论
• 4.1 试验材料的选择
• 4.2 关于DNA抽提的优化
• 4.3 关于PCR扩增反应
• 4.4 关于鸡Pit-1基因的序列多态性分析
• 4.5 鸡Pit-1基因各酶切基因型在不同品种的分布
• 4.6 鸡Pit-1基因酶切多态性与屠宰性状的关系
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢