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核苷酸抗氧化作用及其对小鼠相关基因表达的影响

2020-12-02阅读(698)

核苷酸抗氧化作用及其对小鼠相关基因表达的影响

论文摘要

核苷酸通常被认为是一种条件型营养素,在特定的条件下发挥重要作用。本研究旨在探讨其本身可能存在的清除自由基的能力及其抗氧化特性,进一步揭示核苷酸的作用机制,扩大核苷酸应用的理论和实践基础。本试验采用化学比色法测定四种核苷酸清除羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的能力;采用流动注射化学发光法建立了评价四种核苷酸（5’-AMP、5’-CMP、5’-GMP、5’-UMP）体外抗氧化、清除自由基能力的方法。碱性条件下邻苯三酚产生的超氧离子自由基能诱导增强鲁米诺化学发光,核苷酸对超氧阴离子自由基可能具有清除作用,因而,在鲁米诺发光体系中加入核苷酸可能会抑制鲁米诺化学发光;建立H2O2氧化损伤体外培养脾细胞和肝细胞的模型,用MTT法检测核苷酸的修复作用,并分析了其对细胞抗氧化体系及抗氧化能力的影响;同时采用断奶后的雄性小鼠,分别饲喂添加0、0.25%核苷酸水平的基础日粮15天,对照组灌胃生理盐水,实验组灌胃CpG DNA,4h后比较基因表达的差异,借用基因芯片技术,对核苷酸抗氧化作用的相关基因进行了研究。试验结果表明,核苷酸具有剂量依赖性的体外抗氧化和清除活性氧能力,核苷酸的羟自由基清除能力很高,尤其是5’-磷酸腺苷（5’-AMP）和5’-磷酸胞苷（5’-CMP）清除羟自由基的能力分别相当于维生素C（Vc）的0.75倍。相对的,核苷酸的DPPH自由基的清除能力比较弱。四种核苷酸均能有效的抑制化学发光反应,并且随着核苷酸浓度的升高,抑制率增强。细胞体外培养试验结果表明,添加核苷酸均能修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤,修复作用与浓度呈正比,浓度达到一定高度时修复均显著（P<0.01）,能显著提高总抗氧化能力和抗氧化酶类活力（P<0.01）,显著降低MDA含量（P<0.01）。受损细胞的培养液中添加核苷酸能使其细胞培养液的氧自由基（ROS）水平逐渐降低,核苷酸添加量为10mmol/L时,ROS水平接近对照组水平,说明其具有显著的抗氧化作用。Affymetrix芯片显示CpG DNA刺激导致小鼠的物质能量代谢、抗氧化酶类等基因表达上调,而日粮中添加核苷酸可以相对下调抗氧化酶类基因的表达,却相对上调了DNA损伤修复等基因的表达。从以上试验结果可以看出,核苷酸具有较强的清除自由基的抗氧化能力。其可能通过清除小鼠的氧化损伤产生的自由基,从而改变体内自由基的含量,保护机体免受氧化损伤。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 引言
  • 1.2 核苷酸概述
  • 1.2.1 核苷酸的概念及其生理功能
  • 1.2.2 核苷酸的合成、代谢及消化、吸收
  • 1.3 核苷酸的营养作用
  • 1.3.1 促进生长，增加蛋白和脂肪含量
  • 1.3.2 抗氧化，防衰老
  • 1.3.3 维持器官的正常机能，降低机体损伤、增加修复
  • 1.3.4 提高机体免疫力
  • 1.3.5 持机体平衡状态，降低炎性反应
  • 1.4 立题意义与本课题主要研究内容
  • 第二章 流动注射化学发光法的建立
  • 2.1 引言
  • 2.2 材料与仪器
  • 2.2.1 实验材料
  • 2.2.2 实验仪器
  • 2.3 实验方法
  • 2.3.1 邻苯三酚浓度优化
  • 2CO3-NaHCO3 缓冲液pH 值优化'>2.3.2 Na2CO3-NaHCO3 缓冲液pH 值优化
  • 2CO3-NaHCO3 缓冲液稀释倍数优化'>2.3.3 Na2CO3-NaHCO3缓冲液稀释倍数优化
  • 2.3.4 鲁米诺浓度优化
  • 2.3.5 铁氰化钾浓度优化
  • 2.3.6 核苷酸的发光抑制作用
  • 2.3.7 发光抑制率计算
  • 2.3.8 数据分析
  • 2.4 结果
  • 2.4.1 流路及流速的选择
  • 2.4.2 邻苯三酚浓度对抑制率的影响
  • 2CO3-NaHCO3 缓冲液pH 值和稀释倍数对抑制率的影响'>2.4.3 Na2CO3-NaHCO3 缓冲液pH 值和稀释倍数对抑制率的影响
  • 2.4.4 鲁米诺浓度对抑制率的影响
  • 2.4.5 铁氰化钾浓度对抑制率的影响
  • 2.4.6 化学发光体系的建立
  • 2.4.7 5’-AMP 体外清除超氧阴离子自由基能力的评价
  • 2.5 讨论
  • 2.6 本章小结
  • 第三章 核苷酸体外清除自由基作用的研究
  • 3.1 引言
  • 3.2 材料与仪器
  • 3.2.1 实验材料
  • 3.2.2 实验仪器
  • 3.3 实验方法
  • 3.3.1 羟自由基清除率的检测
  • 3.3.2 核苷酸对DPPH 自由基清除作用吸收光谱的检测
  • 3.3.3 DPPH 自由基清除作用的检测
  • 3.3.4 超氧阴离子清除作用的检测
  • 3.3.5 数据分析
  • 3.4 结果
  • 3.4.1 核苷酸清除羟自由基的作用
  • 3.4.2 核苷酸和Vc 清除羟自由基作用的比较
  • 3.4.3 核苷酸清除DPPH 的作用
  • 3.4.4 核苷酸和Vc 清除DPPH 自由基作用的比较
  • 3.4.5 核苷酸清除超氧阴离子的作用
  • 2.5 讨论
  • 2.6 本章小结
  • 2O2所致氧化损伤小鼠脾细胞和肝细胞的保护作用'>第四章 核苷酸对H2O2所致氧化损伤小鼠脾细胞和肝细胞的保护作用
  • 4.1 引言
  • 4.2 材料与仪器
  • 4.2.1 实验材料
  • 4.2.2 实验仪器
  • 4.3 实验方法
  • 2O2 氧化损伤模型的建立'>4.3.1 小鼠脾细胞H2O2氧化损伤模型的建立
  • 2O2 致损伤脾细胞的细胞活力的影响'>4.3.2 MTT 法检测核苷酸对H2O2致损伤脾细胞的细胞活力的影响
  • 4.3.3 小鼠脾细胞培养液的抗氧化指标测定
  • 4.3.4 小鼠脾细胞培养液中ROS 水平的测定
  • 2O2 氧化损伤模型的建立'>4.3.5 小鼠肝细胞H2O2氧化损伤模型的建立
  • 2O2 致损伤肝细胞的细胞活力的影响'>4.3.6 MTT 法检测核苷酸对H2O2致损伤肝细胞的细胞活力的影响
  • 4.3.7 小鼠肝细胞培养液的抗氧化指标测定
  • 4.3.8 数据分析
  • 4.4 结果
  • 2O2 致损伤脾细胞和肝细胞活力的修复作用'>4.4.1 核苷酸对H2O2致损伤脾细胞和肝细胞活力的修复作用
  • 2O2致损伤脾细胞和肝细胞的培养液中T-AOC含量的影响'>4.4.2 核苷酸对体外培养的H2O2致损伤脾细胞和肝细胞的培养液中T-AOC含量的影响
  • 2O2 致损伤脾细胞和肝细胞培养液中GSH-Px 含量的影响'>4.4.3 核苷酸对体外培养的H2O2 致损伤脾细胞和肝细胞培养液中GSH-Px 含量的影响
  • 2O2致损伤脾细胞和肝细胞的培养液中CAT含量的影响'>4.4.4 核苷酸对体外培养的H2O2致损伤脾细胞和肝细胞的培养液中CAT含量的影响
  • 2O2 致损伤脾细胞和肝细胞的培养液中MDA 含量的影响'>4.4.5 核苷酸对体外培养的H2O2 致损伤脾细胞和肝细胞的培养液中MDA 含量的影响
  • 4.4.6 化学发光法测定细胞培养液ROS 水平
  • 4.5 讨论
  • 4.6 本章小结
  • 第五章 核苷酸对小鼠脾脏抗氧化相关基因的影响
  • 5.1 引言
  • 5.2 材料与方法
  • 5.2.1 实验材料
  • 5.2.2 主要仪器
  • 5.3 实验方法
  • 5.3.1 实验设计与处理
  • 4.3.2 日粮与饲养管理
  • 5.3.3 基因表达测定技术路线
  • 5.3.4 功能聚类分析
  • 5.4 结果
  • 5.4.1 基因总体表达情况
  • 5.4.2 Mappfinder 功能聚类分析
  • 5.4.3 核苷酸对CpG DNA 刺激小鼠抗氧化相关基因表达的影响
  • 5.5 讨论
  • 5.6 本章小结
  • 论文主要结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文

    • 相关论文文献

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