论文摘要
【目的】在体外不同共培养体系中观察多发性骨髓瘤(MM)细胞对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)增殖、分化潜能、基因表达及细胞因子表达的影响;并分析正常人BMMSCs与MM细胞相互作用后,对MM细胞周期及细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)基因Cx43、Cx45表达的影响;探讨MM细胞能否在体外诱导正常BMMSCs出现类似MM-BMMSCs样异常及BMMSCs对MM细胞GJIC功能的影响。【方法】验分为三组:对照组,间接共培养组及U266条件培养基(U266-CM)直接共培养组,MM细胞与BMMSCs在体外经不同培养体系共培养后行细胞计数检测BMMSCs增殖能力的变化;Von Kossa染色观察BMMSCs成骨分化潜能的变化;RT-PCR检测MM细胞对BMMSCs基因RANKL/OPG、IL-1β、DKK1表达及细胞因子SDF-1α、IGF-1表达的影响;PI染色流式细胞术(FCM)分析BMMSCs对MM细胞周期的影响,RT-PCR检测BMMScs与MM细胞相互作用后MM细胞Cx43、Cx45基因表达的变化。【结果】BMMSCs与MM细胞间接共培养及与U266-CM直接共培养后增殖能力无明显变化;Von Kossa染色提示两共培养组BMMSCs成骨分化潜能较差,矿化基质沉积较正常对照组少;BMMSCs与MM细胞共培养24h后共培养组RANKL、IL-1β、DKK1基因表达上调,OPG基因表达下调;细胞因子SDF-1表达下调、IGF-1上调;BMMSCs与MM细胞直接及间接共培养后,FCM检测提示共培养组MM细胞S期细胞比例增高,间接共培养组MM细胞Cx43表达无明显变化,但直接共培养组MM细胞Cx43表达明显减低,Cx45两共培养组与对照组无明显差异。【结论】MM细胞与BMMSCs体外共培养可以诱导BMMSCs发生改变,MM细胞可以抑制BMMSCs成骨分化潜能,破骨活化及成骨抑制基因表达增加,这与MM-BMMSCs相似,说明体外MM细胞可以诱导正常BMMSCs出现类似MM-BMMSCs样异常。BMMSCs对MM细胞增殖的促进作用可能与下调MM细胞Cx43的表达有关。
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