贝伐单抗-PLGA缓释微球兔眼玻璃体腔注射的药代动力学及药物分布研究

论文摘要

目的:向兔眼玻璃体腔注射贝伐单抗—PLGA缓释微球,研究其在兔眼内药代动力学及组织分布,评价该剂型眼内应用的安全性及应用前景,为临床应用提供依据。方法:15只健康新西兰大白兔,不分雌雄,左眼注射贝伐单抗-PLGA缓释微球混悬液（约含贝伐单抗1.25mg）,右眼注射贝伐单抗注射液0.05ml（含贝伐单抗1.25mg）,注药前后,裂隙灯显微镜及直接检眼镜观察眼前节及眼底。分别于注药后3d,7d,14d,28d,42d随机选取3只兔子,抽取双眼的房水和玻璃体各0.05ml,后摘除双眼眼球固定于10%中性甲醛溶液中。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各样本中贝伐单抗的浓度,应用3p97软件计算药代动力学参数,采用t检验对数据进行统计学分析;石蜡切片行荧光免疫染色观察药物在组织中的分布。结果:1.裂隙灯及眼底镜检查:术后所有实验动物全身状态良好,未见眼部感染、角膜混浊、白内障、玻璃体混浊及眼底出血等并发症。2.药代动力学参数:注射贝伐单抗-PLGA缓释微球混悬液（约含贝伐单抗1.25mg）的左眼与注射贝伐单抗注射液的右眼玻璃体腔内平均药物浓度比较:于注药后3d分别为（249±0.13）μg/ml和（156±0.20）μg/ml;注药后28d为左眼（45±0.14）μg/ml较右眼的（20±0.23）μg/ml高出约一倍,而注药后42d左眼（14±0.22）μg/ml为右眼的4倍（3.6±0.19）μg/ml;左右眼房水中的平均药物浓度于注药后3d分别为（19±0.22）μg/ml和（16±0.17）μg/ml;注药后14d,平均浓度分别下降为（8±0.17）μg/ml和（2.3±0.04）μg/ml,术后42d左右眼浓度则分别降至（1.2±0.03）μg/ml和（0.3±0.04）μg/ml。贝伐单抗在左眼玻璃体内药物半衰期为9.6d,右眼为3.91d;在左眼房水中为10.2d,右眼为4.1d。左眼与右眼玻璃体及房水内的药物浓度的比较,差别均具有统计学意义,P<0.05。缓释剂型的AUC0-t为注射剂型的2倍（P<0.05）,生物利用度Fr显著提高。3.荧光免疫组化染色:术后双眼视网膜、脉络膜、虹膜睫状体、房角等组织均可见药物分布,且血管化组织分布明显,术后3d、7d双眼荧光闪亮,记录为（+++）,随时间推移,左眼术后14d、28d可见明亮荧光（++）,到术后42d仍可见较弱荧光（+）;右眼14d明亮荧光（++）,但较左眼弱,28d仅见微弱荧光（+）,42d荧光不可见（-）。结论:玻璃体内注射贝伐单抗-PLGA缓释微球（约含贝伐单抗1.25mg）,通过组织形态学观察,初步证明该缓释剂型对兔眼视网膜无明显毒性,该剂型的进一步研发仍需电镜观察视网膜细胞,视网膜电图检测视网膜功能来验证其安全性。缓释微球释放的贝伐单抗在眼组织中的渗透及分布与溶液剂型未见明显差别,但在注药后14d、28d均可见注射缓释微球眼的免疫荧光强度较对侧眼强,且42d仍可见微弱荧光,提示该剂型缓慢释放出游离的贝伐单抗并与眼内VEGF结合,作用时间延长;通过两组剂型的药代动力学参数及浓度时间曲线的比较也可看出微球的缓释作用。总之,贝伐单抗-PLGA缓释微球有望成为治疗新生血管性眼病的新剂型,减少眼内注射次数,降低手术风险。

论文目录

• 一、摘要
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• 二、正文
• （一） 前言
• （二） 材料与方法
• （三） 结果
• （四） 讨论
• （五） 结论
• （六） 附图
• （七） 参考文献
• 三、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 四、致谢