恶黑细胞中的谷氨酸信号通路及其与细胞骨架蛋白分子的作用机制

论文摘要

目的:研究恶黑细胞中的谷氨酸信号通路及其与细胞骨架蛋白分子的作用机制。方法:1微管相关蛋白2a （Microtubule-associated protein 2a,MAP2a）、离子型谷氨酸受体中的甲基-D-天冬氨酸受体2A（N-methyl-D-aspartate receptors 2A,NMDAR2A）、代谢型谷氨酸受体1（metabotropic glutamate receptor 1,mGluR1）在人类侵袭性恶黑细胞WM451LU细胞中的亚细胞分布差异研究:培养人胚肾细胞系HEK293细胞、WM451LU细胞;在HEK293细胞中扩增重组腺病毒-微管相关蛋白2a（adenovirus-mediated MAP2a,Ad-MAP2a）;对WM451LU细胞MAP2a基因转染后进行免疫荧光双重染色及倒置荧光显微镜下观察WM451LU细胞中MAP2a、NMDAR2A及mGluR1的细胞内分布;进一步在激光扫描共聚焦显微镜下观察WM451LU细胞中MAP2a与NMDAR2A及mGluR1的亚细胞分布。2上调MAP2a表达及神经保护化学药干预对WM451LU细胞形态的影响观察:观察转染Ad-MAP2a、NMDAR非竞争性拮抗剂MK-801以及选择性的非竞争性mGluR1拮抗剂CPCCOEt分别作用下,WM451LU细胞中α-微管蛋白（α-tubulin）的分布、密度以及细胞形态的变化。在原子力显微镜下观察上调MAP2a表达、MK-801及CPCCOEt分别及协同作用下WM451LU细胞树突形态的影响。3转染Ad-MAP2a对WM451LU细胞内NMDAR2A及mGluR1蛋白表达水平的影响:通过流式细胞仪及Western Blot方法测定转染Ad-MAP2a后WM451LU细胞内NMDAR2A及mGluR1的表达。4观察CPCCOEt及MK-801对WM451LU细胞生长的影响。结果:1研究发现在人类侵袭性恶黑细胞WM451LU细胞中有NMDAR2A及mGluR1的表达。NMDAR2A及mGluR1与微管相关蛋白MAP2a在WM451LU细胞中具有相同的亚细胞定位:均分布于细胞浆内,并且主要位于细胞树突内。2转染Ad-MAP2a后WM451LU细胞内α-tubulin的密度明显增加,细胞的树突明显增长,并且α-tubulin主要位于增长的细胞树突内。在谷氨酸受体拮抗剂MK-801及CPCCOEt作用下WM451LU细胞内α-tubulin的密度明显增大,细胞的树突纤细而狭长,明显不同于阴性对照组细胞短而粗的细胞树突,且α-tubulin主要分布于纤细、狭长的细胞树突内。3 MK-801单独以及与MAP2a协同作用下WM451LU细胞恢复树突化,其中以二者协同作用下细胞形态的改变更为显著,细胞树突明显延长,出现大量二级、三级细胞树突,呈现出与正常黑色素细胞所特有的细胞形态极其相似的细胞形态。4转染Ad-MAP2a后NMDAR2A及mGluR1的表达量无明显变化。5 MK-801及CPCCOEt对人类侵袭性恶黑细胞WM451LU细胞增殖具有显著抑制作用。结论:1 WM451LU细胞中有NMDAR2A及mGluR1的表达,且其亚细胞分布与MAP2a一致。2 MK-801以及CPCCOEt具有诱导WM451LU细胞树突形成的作用,并可使WM451LU细胞树突内的微管蛋白密度增加。3 MK-801单独以及与MAP2协同作用下可诱导WM451LU细胞树突形成,使其呈现出与正常黑色素细胞所特有的细胞形态极其相似的细胞形态,其中以二者协同作用下细胞形态的改变更为显著。4 MK-801以及CPCCOEt体外可抑制WM451LU细胞的增殖。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢