烟草表达粉尘螨1类变应原及其免疫治疗研究

论文摘要

目的构建粉尘螨Ⅰ类变应原（Der f1）瞬时表达载体TRBO-Der f1,观察其在烟草中的表达并探讨烟草表达的Der f1疫苗免疫治疗过敏性哮喘的疗效。方法1.重组质粒TRBO-Der f1的构建及在烟草叶片中的表达以粉尘螨总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Derf1基因并定向克隆到瞬时表达载体TRBO,转化根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens） GV3101株后,抽提质粒进行酶切及PCR鉴定。将含TRBO-Der f1重组质粒的GV3101注射本氏烟叶片,SDS-PAGE电泳检测注射3、4、5、6天后Der f1的表达。2.烟草表达的粉尘螨Ⅰ类变应原对哮喘小鼠气道炎症的免疫治疗研究100只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为PBS组即阴性对照组,阳性对照卵白蛋白（OVA）组,原核表达Der f1（pDer f1）组,烟草表达Der f1（tDer f1）组,烟草表达蛋白免疫治疗组（tDer f1-T）, PBS组用PBS,其余4组分别用OVA、pDer f1, tDer f1, tDer f1致敏激发BALB/c小鼠,于0、7、14天腹腔注射致敏,第21天雾化吸入激发,连续7天,24h后,各组小鼠引颈处死；保留tDer f1-T组继续用tDerfl免疫治疗；通过肺组织病理切片观察小鼠肺部炎症；收集支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞及分类计数；ELISA法检测BALF.脾细胞培养上清（SCCS）的特异性细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-y和血清中变应原特异性IgE. IgG1抗体浓度。结果1.重组质粒TRBO-Der f1的构建及在烟草叶片中的表达电泳及测序表明Derfl基因克隆成功,大小为627bp。经PCR及酶切反应证实重组质粒TRBO-Der f1成功转入根癌农杆菌。SDS-PAGE电泳检测表明,该蛋白于第5和6天在烟草叶片中高表达。2.烟草表达的粉尘螨Ⅰ类变应原对哮喘小鼠气道炎症的免疫治疗研究烟草表达蛋白免疫治疗组肺部变态反应性炎症病理变化较模型组明显减轻；BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞计数、IL-4、IL-5、IL-17、血清抗原特异性IgE抗体和脾细胞分泌IL-4、IL-5、IL-17均低于阳性对照组；BALF和SCCS中IL-2、IFN-y含量均高于阳性对照组。结论构建的瞬时表达重组载体TRBO-Der f1成功表达于烟草叶片,为进一步研究粉尘螨植物疫苗奠定了基础；烟草表达的粉尘螨Ⅰ类变应原疫苗免疫治疗可抑制小鼠肺部过敏性炎症。图[8]表[7]参考文献[75]

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 注释说明清单
• 引言
• 1 研究背景
• 1.1 植物源性重组疫苗的研究进展
• 1.2 哮喘的特异性免疫治疗
• 2 瞬时表达重组载体TRBO-Derf1的构建及其在烟草中的表达
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 3 重组蛋白对哮喘小鼠模型的特异性免疫治疗效果研究
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录A
• 附录B
• 后记或致谢
• 作者简介及读研期间主要科研成果