大花高代组织培养与诱变的研究

论文摘要

本试验利用二倍体大花高代种子为材料,建立大花高代离体快速繁殖体系,研究大花高代组织培养结合诱变的效应,筛选出优良变异的植株,丰富种质资源,提高观赏价值,为今后的花卉引种育种研究开辟了一条可尝试的新途径。试验结果如下:1、在MS（对照）、MS+ZT0.5、MS+TDZ0.5、MS+2,4-D0.5、MS+NAA0.5五种培养基中,MS+ZT0.5、MS+TDZ0.5这两种愈伤组织诱导培养基中,外植体不仅产生了愈伤组织,而且还分化出了不定芽。MS+ZT0.5中不定芽分化率高达83%,本试验中,以MS+ZT0.5为大花高代愈伤组织和不定芽诱导最适培养基,1/2MS+IBA2作为大花高代试管苗最适生根培养基。2、以0Gy、10Gy、50Gy、100Gy、150Gy和200Gy不同剂量的60Coγ射线辐射种子,研究其对大花高代组培苗生长影响的结果表明,在50-200Gy范围内,根和真叶的生长以及植株高度都不同程度地受到了抑制,且抑制程度与辐射剂量呈正相关,而10Gy则能促进根和真叶的生长。随着剂量的增高,死亡率增高,组培苗生长41d时的半致死剂量(LD50)为150Gy。各处理组培苗培养70d后,少量瓶内开花,出现花型、花色和花瓣变异。以上结果表明,60Coγ射线辐射可以提高突变频率且诱变效应明显,有利于在大花高代育种中产生色彩丰富,花型、株型美观的变异类型。3、用不同浓度的秋水仙素分别浸泡大花高代萌动种子6h、24h,随着秋水仙素浓度的提高,组培苗受到的伤害越大,死亡率越高,低浓度的长时间处理要比高浓度的短时间处理伤害更大,在组培苗的长势及丛生芽分化上,均表现出同样的效应。本试验中,秋水仙素浸泡6h的植株受害较小,且在0.4%浓度下诱导出了加倍的植株,加倍率可达42%。加倍植株在形态上表现为叶片肥厚,叶色加深,茎秆粗壮,节间较短,叶片和茎秆上多毛,生长势强;在花型和花色上表现出了花型的变异和花色的加深。采用BD FACS Calibur流式细胞仪进行倍性鉴定表明:大花高代变异植株DNA含量分布,为二倍体和四倍体的嵌合体。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 大花高代的生物学特性及观赏价值
• 1.2 大花高代组培结合诱变育种的意义
• 1.3 变异材料产生途径
• 1.3.1 辐射方法
• 1.3.2 多倍体诱导
• 1.4 多倍体植株的鉴定
• 1.5 诱变结合组培研究中存在的问题及展望
• 1.5.1 辐射育种存在的问题及展望
• 1.5.2 多倍体育种存在的问题及展望
• 1.6 本研究的目的及内容
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 试验技术路线
• 2.2.2 大花高代组织培养的方法与步骤
• 2.2.3 辐射处理
• 2.2.4 秋水仙素诱导多倍体
• 2.2.5 试验统计与数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 大花高代组织培养试验分析
• 3.1.1 无菌苗的建立
• 3.1.2 愈伤组织的诱导与分化
• 3.1.3 不定芽的伸长
• 3.1.4 试管苗生根诱导
• 60Coγ射线种子辐射对大花高代组培苗的生长及诱变效应'>3.2⁶⁰Coγ射线种子辐射对大花高代组培苗的生长及诱变效应
• 3.2.1 不同辐射剂量对大花高代种子发芽率的影响
• 3.2.2 不同辐射剂量对大花高代组培苗根和真叶发生的影响
• 3.2.3 不同辐射剂量对大花高代组培苗死亡率的影响
• 3.2.4 不同辐射剂量对大花高代组培苗的矮化效应
• 3.2.5 不同辐射剂量对大花高代诱变效应的影响
• 3.3 秋水仙素处理对大花高代组培苗的生长分化及诱变效应
• 3.3.1 不同处理对大花高代发芽率的影响
• 3.3.2 不同处理对大花高代组培苗长势及死亡率的影响
• 3.3.3 不同处理对大花高代丛生芽分化的影响
• 3.3.4 大花高代染色体数目鉴定
• 3.3.5 大花高代多倍体鉴定
• 3.3.6 流式细胞仪测定DNA含量鉴定结果
• 4 总结与讨论
• 4.1 大花高代植株再生体系的建立
• 4.1.1 愈伤组织及不定芽的诱导
• 4.1.2 不定芽的伸长
• 4.1.3 试管苗生根、移栽
• 60Coγ射线辐射种子'>4.2⁶⁰Coγ射线辐射种子
• 4.3 秋水仙素处理诱导多倍体的效应
• 4.4 多倍体诱导中的嵌合体现象
• 4.5 倍性鉴定
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文