论文摘要
大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其常用的治疗方式是手术、化疗、放疗等,近年来生物治疗引人注目,成为大肠癌治疗的第四种方式,尤其是肿瘤基因治疗已成为研究热点。自杀基因又称为酶解前药基因,是利用转基因技术,将某些细菌及病毒中特有的药物敏感基因（自杀基因）转导入肿瘤细胞,该基因表达的产物,可以将无毒的或低毒的药物前体,转化为细胞毒性和/或对放疗敏感的药物,从而影响肿瘤细胞的遗传物质合成,引起肿瘤细胞的死亡。双自杀基因疗法是利用基因工程的技术,将两种自杀基因整合在一起,通过载体转导入肿瘤细胞,使其在肿瘤细胞内表达融合基因产物,此产物具有两种自杀基因编码的酶的活性。然后给予双前体药物治疗,从而对两类不同的前体药物敏感,而发挥双功能的杀伤作用。目前双自杀基因多为CD-TK融合基因。KDR（kinase domain insert containing receptor）是血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的4种受体之一,其在肿瘤血管内皮细胞能高效表达,在肿瘤血管形成过程中起着关键作用,高表达于肿瘤新生血管内皮细胞及恶性程度高的肿瘤细胞[1,2] ,且肿瘤细胞表达多强于内皮细胞,是一个具有高度特异性的肿瘤治疗靶点。为此我们构建含有HSV-TK,GCV-CD,KDR基因的共表达的腺病毒载体;研究KDR-CD-TK系统对大肠癌细胞的杀伤作用。利用重组DNA技术,构建含HSV-TK、GCV-CD,KDR基因的共表达载体pAdKDR-CDglyTK。在脂质体介导下转染293包装细胞,G418筛选出抗性克隆SW480,以PCR、RT-PCR、等对pKDR-CDglyTK系统修饰的SW480细胞进行鉴定。通过观察基因修饰细胞生长状况、MTT法及流式细胞仪观察GCV、5-FC对SW480细胞的杀伤效应。在体外,GCV、5-FC可诱导SW480细胞凋亡,且凋亡百分率随GCV+5-FC作用时间的增加而升高;经GCV5-FC作用后的SW480细胞,阻滞于S期;大肠癌细胞SW480对GCV+5-FC系统高度敏感。并且对体内其他部位未转染KDR-TK/CD基因大肠癌细胞,产生远距离旁观者效应明显。经过1.0GyCo60对SW480细胞照射后,腺病毒转染率明显生高,γ射线能够增加转染TK/CD基因的SW480细胞对前药的敏感性,前药（GCV+5-FC）能提高细胞对γ射线具有放射敏感性,与γ射线具有协同作用。