论文摘要
目的:测定大鼠肠梗阻后肠道吸收和屏障功能的变化,以期深入探讨不同程度肠梗阻的病理生理变化过程。方法:以自制塑胶条结扎回肠末端方法建立大鼠不完全性和完全性单纯低位小肠梗阻模型,分别于3、5、7天收集标本。测量梗阻部位以上肠管周径,组织病理学检查观察梗阻部位以上肠管的病理组织学变化;应用D-木糖吸收实验和荧光实时定量RT-PCR检测Na+依赖性葡萄糖转运体1（SGLT1）、肽转运载体1（PEPT1）的mRNA的表达评价肠道的吸收功能;应用免疫荧光和Western Blot技术检测小肠黏膜紧密连接结构蛋白occludin的表达,测定外周血二胺氧化酶（DAO）含量,高效液相色谱分析技术测定尿中乳果糖/甘露醇（L/M）比值来评价肠梗阻时肠道的机械屏障;通过测定小肠黏膜蛋白含量、放射免疫分析技术测定肠内容物分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量来评价肠道的免疫屏障;通过测定门静脉血内毒素的水平,对肠系膜淋巴结、肝、脾组织和器官的细菌培养来评价肠道肠道细菌及内毒素易位;应用放射免疫分析技术测定外周血肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量,观察肠梗阻时的全身性炎症反应情况。结果:1.相同时间点,实验组大鼠小肠周径明显高于对照组,实验组组间比较,3天时,小肠周径有明显差异,5天和7天时无明显差异。2.HE染色病理组织切片显示正常大鼠小肠黏膜腺体丰富,轮廓清晰。肠梗阻时,随梗阻程度加重及时间延长,小肠黏膜腺体可出现轻至重度坏死。3.血清D-木糖浓度在实验组7天时降低,差异有统计学意义。4.小肠组织SGLT1 mRNA表达在完全梗阻组5天时即显著降低,在不完全梗阻组7天时降低,与对照组比较,差异有统计学意义。5.小肠组织PEPT1 mRNA表达在完全梗阻组5天时即显著降低,在不完全梗阻组7天时虽有降低,但与对照组比较无统计学差异。6.相关性分析显示血清D-木糖浓度与SGLT1 mRNA表达呈正相关。7.免疫荧光检测见小肠黏膜紧密连接结构蛋白occludin主要表达于肠上皮细胞表面、细胞间和胞质,Western Blot对小肠组织occludin蛋白进行半定量分析,结果显示在实验组5天时即明显降低。8.血清DAO浓度和尿L/M比值在完全梗阻组3天、不完全梗阻组5天时升高。9.小肠黏膜蛋白浓度在完全梗阻组5天、不完全梗阻组7天时明显降低。不同时间点完全梗阻组3天与5天、7天比较差异显著。10.肠内容物sIgA浓度在完全梗阻组5天、不完全梗阻组7天时明显降低。不同时间点实验组组内比较,3天与7天差异显著。11.门静脉血内毒素水平在完全梗阻组3天、不完全梗阻组5天时明显升高。不同时间点实验组组内比较,在不完全梗阻组3天、5天与7天,完全梗阻组3天与7天比较有显著差异。12.肠系膜淋巴结、肝、脾组织和器官的细菌菌落计数在完全梗阻组3天、不完全梗阻组5天时显著升高。相同时间点实验组组间比较3天时有显著差异,5天和7天时无显著差异。不同时间点实验组组内比较,3天与5天、7天比较差异显著。13.血清TNF-α浓度在完全梗阻组3天、不完全梗阻组5天时显著升高。不同时间点实验组组内比较,不完全梗阻组3天与7天有显著差异。14.相关性分析发现内毒素水平与DAO、TNF-α浓度呈正相关关系,与sIgA浓度呈负相关关系。结论:1.肠梗阻时小肠周径增加,随梗阻程度加重及时间延长,小肠黏膜腺体可出现轻至重度坏死。2.肠梗阻时随病程进展逐渐出现营养物质吸收功能障碍,肠道对肽类和糖类物质的吸收障碍是由于小肠组织SGLT1和PEPT1mRNA表达减少所致。3.肠梗阻时小肠黏膜紧密连接结构蛋白的破坏、表达减少或缺失是导致肠道通透性增加的原因。4.肠梗阻时小肠黏膜蛋白和肠内容物sIgA浓度浓度降低引起肠道免疫屏障障碍。5.由于肠道通透性增加和肠道免疫屏障障碍引起肠道细菌和内毒素易位,导致全身性炎症反应。
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