辛伐他汀对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡及OPG mRNA RANKL mRNA水平的影响

论文摘要

目的:评价辛伐他汀对前成骨细胞MC3T3—E1增殖、凋亡及OPG mRNA RANKL mRNA水平的影响,探讨辛伐他汀通过成骨细胞进而影响骨代谢的可能机制。方法:（1） MC3T3-E1细胞的传代培养。（2）不同浓度的辛伐他汀干预前成骨细胞MC3T3—E1,采用噻唑蓝（MTT）法测定OD值（辛伐他汀10-9,10-8,10-7, 10-6mol/L）及流式细胞仪检测细胞周期（辛伐他汀10-8,10-7,10-6, 10-5mol/L）,了解辛伐他汀对细胞增殖能力的影响。（3）不同浓度（10-8,10-7,10-6,10-5mol/L）的辛伐他汀干预前成骨细胞MC3T3—E1,流式细胞仪检测亚二倍体百分数,了解辛伐他汀对细胞凋亡的影响。（4）不同浓度（10-9,10-8,10-7,10-6mol/L）的辛伐他汀干预前成骨细胞MC3T3—E1,用rt-PCR的方法检测OPG mRNA RANKL mRNA的表达水平。（5）统计学方法:数据用x±s表示,采用SPSS 11.5统计分析软件对实验数据进行分析,各组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVE）。P<0.05,有统计学差异。结果:（1）辛伐他汀抑制MC3T3—E1细胞的增殖。MTT显示用药各组与DMSO对照组比较,均抑制MC3T3-E1的增殖,且差异具有显著性（P<0.01）,并且随着辛伐他汀浓度的递增,细胞的OD值呈现下降的趋势,具有浓度依赖性。流式细胞仪DNA含量分析显示,用药各组与DMSO对照组相比较,细胞增值指数（ PI = G0 G S1++GS2+MG2M ）明显减少（P<0.01）,其中10-8mol/L和10-7mol/L两组及10-6mol/L和10-5mol/L两组之间无统计学差异（P>0.05）,其余任意两组均有统计学差异（P<0.05）。（2）辛伐他汀促进MC3T3—E1细胞的凋亡。用药各组与DMSO对照组相比较,亚二倍体百分数均呈现增大趋势,除10-6mol/L和10-7mol/L两组之间无统计学差异（P>0.05）外,其余任意两组均有统计学差异（P<0.05）。同时镜下观察细胞形态随药物浓度增大细胞出现变圆等死亡征象,以10-5,10-6mol/L为显著。（3）半定量RT—PCR显示在辛伐他汀干预24h时,用药各组与DMSO对照组相比较, OPG mRNA的表达增多,而RANKL mRNA的表达减少,且任意两组比较均有统计学差异（P<0.01）,具有浓度依赖性。结论:（1）辛伐他汀抑制MC3T3—E1细胞的增殖。（2）辛伐他汀促进MC3T3—E1细胞的凋亡。（3）辛伐他汀促进MC3T3—E1细胞OPG mRNA的表达,同时抑制RANKL mRNA的表达。证明了辛伐他汀可以通过作用于成骨细胞影响OPG及RANKL的表达来抑制破骨细胞的增殖、分化、成熟,进而抑制骨吸收。

论文目录

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