蛇床子素对南瓜白粉病的防治效果与作用模式

蛇床子素对南瓜白粉病的防治效果与作用模式

论文摘要

天然香豆素类化合物蛇床子素(Osthol,8-(3-甲基-2-丁烯基)甲醚馓形酮)对多种植物病原真菌具有良好的抑制作用,尤其对瓜类白粉病菌有特效。本文以南瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuligina)及其寄主为研究对象,通过施用蛇床子素,主要研究了蛇床子素对“白粉病菌-南瓜植株”互作系统的影响,为蛇床子素抑菌机理的深入研究及新型杀菌剂的研发提供理论基础。本研究首先通过敏感性试验确立了南瓜白粉病菌对蛇床子素的敏感性浓度并通过室内和小区药效试验确认了蛇床子素对南瓜白粉病菌的防治效果。通过离体叶片二氨基联苯胺染色法,我们研究了蛇床子素对南瓜白粉病菌侵染过程的影响,结果显示,100μg·mL-1蛇床子素不仅能够有效抑制白粉病菌的孢子萌发,减少成功侵入的孢子总数,而且还能够抑制芽管伸长和菌丝生长,在不延长孢子形成周期的情况下减少了分生孢子形成数量,防止病原菌再次侵染。水滴试验及酯酶活性检测结果表明,蛇床子素通过抑制白粉病菌胞外酯酶的分泌减弱了白粉病菌对寄主表皮的吸附作用,从而有效地减弱了病原菌对寄主的入侵。扫描电镜和透射电镜的观察发现,蛇床子素能够引起白粉病菌菌丝体皱缩凹陷、细胞壁消融、细胞器溶解并伴随细胞内容物外泄。对南瓜植株的研究发现,蛇床子素能够引起南瓜叶片内可溶性蛋白含量增加以及抗性相关酶类如几丁质酶和过氧化物酶活性的增强。通过RT-PCR法,我们进一步研究了南瓜叶片内几丁质酶基因的转录情况,结果显示蛇床子素处理的南瓜叶片组织内几丁质酶基因在转录水平上的表达量明显高于对照。南瓜叶片内总蛋白双向电泳图谱显示,蛇床子素能够引起南瓜叶片内多种蛋白含量发生改变。全文研究表明蛇床子素能够有效地防治南瓜白粉病的发生,其抑菌作用方式不仅表现在对白粉病菌入侵过程的直接影响,而且能够调节植物生长,提高寄主的抗病能力,抵御病原菌的入侵,其抑菌作用模式是多位点的。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 第一章 文献综述
  • 第一节 瓜类白粉病研究进展
  • 1 瓜类白粉病的发生规律
  • 2 瓜类白粉病的防治现状
  • 第二节 植物源杀菌剂研究进展
  • 1 植物源杀菌剂活性成分研究概况
  • 2 植物源杀菌剂作用机理研究概况
  • 3 香豆素类化合物及蛇床子素抑菌活性研究进展
  • 第三节 植物诱导抗病性研究进展
  • 1 抗病诱导因子
  • 2 诱导产生的抗病性物质
  • 2.1 抗真菌蛋白类
  • 2.2 真菌酶抑制剂及毒性化合物
  • 2.3 信号分子物质
  • 2.4 起化学屏障作用的物质
  • 3 植物诱导抗病性机制的研究
  • 参考文献
  • 第二章 白粉病菌入侵对不同南瓜品种的病理和生理影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试南瓜品种及病原菌
  • 1.2 病原菌的接种及组织病理学观察
  • 1.3 抗性相关酶电泳分析
  • 2 结果与分析
  • 2.1 白粉病菌的侵染过程比较
  • 2O2的检测'>2.2 入侵位点H2O2的检测
  • 2.3 同工酶电泳谱带分析
  • 2.3.1 过氧化物酶同工酶谱变化
  • 2.3.2 多酚氧化酶同工酶谱变化
  • 2.3.3 超氧化物岐化酶同工酶谱的变化
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 第三章 蛇床子素对南瓜白粉病的防治研究
  • 第一节 南瓜白粉病菌对蛇床子素的敏感性研究
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试南瓜品种
  • 1.2 菌种采集、繁殖和保存
  • 1.3 供试药剂
  • 1.4 接种方法
  • 1.5 测定方法
  • 1.6 分级标准
  • 1.7 统计分析方法
  • 2 结果与分析
  • 第二节 蛇床子素对南瓜白粉病的防治试验
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试药剂
  • 1.2 供试菌株
  • 1.3 供试南瓜品种
  • 1.4 蛇床子素内吸效果测定
  • 1.5 蛇床子素保护、治疗效果测定
  • 1.6 小区防效试验
  • 2 结果与分析
  • 2.1 蛇床子素的内吸效果测定
  • 2.2 蛇床子素的防、治效果比较
  • 2.3 蛇床子素水乳剂的小区防效试验
  • 本章小结
  • 参考文献
  • 第四章 蛇床子素对南瓜白粉病菌的影响
  • 第一节 蛇床子素对白粉病菌入侵过程的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试药剂
  • 1.2 供试南瓜品种及菌种
  • 1.3 试验方法
  • 1.3.1 黏附相关试验
  • 1.3.2 孢子入侵观察
  • 1.3.3 孢子萌发试验
  • 1.3.4 白粉病菌生长过程观察
  • 2 结果与分析
  • 2.1 蛇床子素对白粉孢子黏附力的影响
  • 2.2 蛇床子素对孢子入侵的影响
  • 2.3 蛇床子素对孢子萌发的影响
  • 2.4 蛇床子素对菌丝生长及分生孢子形成的影响
  • 3 讨论
  • 第二节 蛇床子素对白粉病菌形态学影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试药剂
  • 1.2 供试南瓜品种及菌种
  • 1.3 接种及药剂处理
  • 1.4 切片及光镜观察
  • 1.5 样品处理及电镜观察
  • 2 结果与分析
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 第五章 蛇床子素对南瓜白粉病菌寄主的影响
  • 第一节 蛇床子素对南瓜叶片内防御相关酶类的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试药剂
  • 1.2 供试南瓜品种及菌种
  • 1.3 试验处理
  • 1.4 相关酶活力测定方法
  • 1.4.1 可溶性蛋白含量测定
  • 1.4.2 几丁质酶(chitinase)活性测定
  • 1.4.3 过氧化物酶(POD)活性测定
  • 1.4.4 苯丙氨酸解氮酶(PAL)活性测定
  • 2 结果与分析
  • 2.1 蛇床子素对南瓜叶片可溶性蛋白的影响
  • 2.2 蛇床子素对南瓜叶片几丁质酶活性的影响
  • 2.3 蛇床子素对南瓜叶片过氧化物酶活性的影响
  • 2.4 蛇床子素对南瓜叶片苯丙氨酸解氨酶活性的影响
  • 3 讨论
  • 第二节 蛇床子素对南瓜几丁质酶基因转录的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试南瓜品种
  • 1.2 试剂及试剂盒
  • 1.3 试验处理
  • 1.4 几丁质酶基因克隆
  • 1.4.1 南瓜叶片总RNA提取
  • 1.4.2 总RNA定量与完整性检测
  • 1.4.3 RNA中基因组DNA的去除
  • 1.4.4 第一链cDNA的合成
  • 1.4.5 引物设计与合成
  • 1.4.6 RT-PCR反应体系及程序
  • 2 结果与分析
  • 3 讨论
  • 第三节 南瓜叶片总蛋白表达谱分析
  • 1 材料与方法
  • 1.1 供试南瓜品种
  • 1.2 供试药剂
  • 1.3 试验处理
  • 1.4 南瓜叶片总蛋白的提取
  • 1.5 双向电泳流程
  • 1.6 检测
  • 2 结果与分析
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 第六章 全文小结
  • 附录:硕士在读期间发表文章及所受奖励
  • 致谢
  • 相关论文文献

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