论文题目: 蝎毒体外抗肿瘤作用的实验研究及机制探讨
论文类型: 博士论文
论文专业: 放射医学
作者: 付士波
导师: 鞠桂芝
关键词: 蝎毒,细胞周期,细胞凋亡
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 恶性肿瘤是严重威胁人类生命安全的疾病之一。寻求高效低毒的抗肿瘤药物及治疗方法一直是科学界研究的热点。蝎毒是一种生物毒素,因其具有广泛的生理学效应而倍受关注。本研究旨在研究蝎毒的抗肿瘤作用并对其抗肿瘤作用机制进行探讨。采用传统柱层析方法对蝎毒粗提物进行分离纯化;采用MTT 法和集落形成法检测蝎毒及其组分对不同肿瘤细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术(FCM)检测蝎毒及其组分对不同肿瘤细胞周期及凋亡相关蛋白的影响;采用原位末端标记法(TUNEL)和FCM 技术检测蝎毒及其组分对不同肿瘤细胞凋亡的影响。结果表明,蝎毒及其分离组分可明显抑制多种肿瘤细胞包括小鼠黑色素瘤B16 细胞、人结肠腺癌HCT-8 细胞、人卵巢癌SKOV-3 细胞和人肾癌EJ 细胞的生长。其机制与蝎毒及其组分可诱导肿瘤细胞发生G1、 G2及S期阻滞进而影响细胞周期进程,以及通过调控促凋亡基因及抑凋亡基因的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。同时证实,蝎毒分离组分的抑瘤作用好于蝎毒粗提物。本研究结果将为抗肿瘤药物的开发及蝎毒素抗肿瘤的临床应用提供实验依据。
论文目录:
前言
英文缩写
第一章 绪论
1. 肿瘤治疗现状
1.1 手术治疗
1.2 放射治疗
1.3 化学治疗
1.4 生物治疗
2. 中医治疗肿瘤
2.1 扶正固本法
2.2 理气活血法
2.3 健脾益肾法
2.4 软坚散结法
2.5 以毒攻毒法
2.6 养阴清热法
2.7 清热解毒法
3. 细胞凋亡及信号转导通路
3.1 细胞凋亡的概念
3.2 细胞凋亡的特征及其检测方法
3.3 细胞凋亡的基因调控
3.4 凋亡的信号转导通路
4. 蝎毒生物效应研究进展
4.1 蝎毒素简介
4.2 抗癫痫作用
4.3 镇痛作用
4.4 抗肿瘤作用
4.5 离子通道作用
4.6 增敏作用
4.7 其他作用
5. 立题依据
第二章 材料与方法
1. 主要试剂及器材
1.1 试剂
1.2 器材
2. 主要仪器
3. 细胞株
4. 蝎毒的分离纯化和鉴定
4.1 蝎毒的分离纯化
4.2 蝎毒的分子量鉴定
5. 细胞生物学方法
5.1 培养液配制
5.2 小牛血清制备
5.3 胰酶配制
5.4 细胞培养
5.5 细胞冻存
5.6 细胞存活试验
5.7 集落形成实验
5.8 TUNEL 法检测细胞凋亡
5.9 FCM 检测细胞凋亡
5.10 细胞周期检测
6. 分子生物学实验方法
6.1 引物设计及合成
6.2 肿瘤细胞总RNA 的提取和定量
6.3 RT-PCR 法
6.4 琼脂糖凝胶电泳和灰度分析
7.F CM 检测Survivin 和Caspase-3 蛋白的表达
7.1 细胞培养
7.2 抗体标记
7.3 流式细胞术检测蛋白表达
8. 统计学方法
第三章 结果
1. 蝎毒的分离、纯化及鉴定
2. 蝎毒及其组分对体外培养肿瘤细胞的抑制作用
2.1 蝎毒及其组分对肿瘤细胞存活率的影响
2.2 蝎毒及其组分对肿瘤细胞集落形成的影响
3. 蝎毒及其组分对肿瘤细胞抑制作用的机制
3.1 蝎毒及其组分对肿瘤细胞周期的影响
3.2 蝎毒及其组分对肿瘤细胞凋亡的影响
3.3 肿瘤细胞凋亡相关基因转录水平的变化
3.4 细胞凋亡相关蛋白表达的变化
第四章 讨论
结论
参考文献
附录
攻博期间发表的学术论文及其他成果
致 谢
中文摘要
Abstract
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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