褪黑色素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤保护作用的研究

论文摘要

目的:探讨褪黑色素（melatonin,MEL）对过氧化氢氧化损伤的人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial ,RPE）的保护作用及其机制。方法:采用600μmol·l-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。过氧化氢作用时间为1h。试验分为:对照组、过氧化氢模型组、过氧化氢+10-7mol·l-1MEL组、过氧化氢+10-6mol·l-1MEL组、过氧化氢+10-5mol·l-1MEL组、过氧化氢+10-4mol·l-1MEL组。通过MTT法检测细胞活性;测定细胞内SOD和MDA检测细胞氧化损伤程度;分别用DNA Ladders法电泳和Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术定性和定量检测细胞的凋亡情况。结果:1过氧化氢氧化损伤作用可以显著降低细胞的活性,与对照组相比较,差异有极显著性,P<0.01。MEL各组的A490值均明显增高,与模型组比较,差异有显著性,P<0.01。而且随着MEL浓度的升高呈有升高的趋势。2与对照组比较,过氧化氢模型组SOD活性明显降低,而MDA含量增高,差异有显著性,P<0.01。与过氧化氢模型组比较,MEL药物干预各组SOD活性随MEL浓度增大有升高趋势,MDA含量随MEL浓度增大而减少,差异具有显著性,P<0.01。3细胞凋亡情况的观察:3.1 DNA Ladders法半定量检测MEL对过氧化氢氧化损伤的人RPE细胞凋亡情况。结果发现:对照组几乎没有细胞凋亡的小片段DNA条带,氧化损伤组可见接近180-200bp整数倍的DNA条带,而在各个MEL干预组,发现这种凋亡条带较氧化损伤组明显减弱,其中在过氧化氢+10-6mol·l-1MEL组表现最为明显。3.2 Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测RPE凋亡流式细胞仪分析各个实验组的细胞凋亡率。与对照组比较,过氧化氢模型组的凋亡率明显升高;与过氧化氢模型组比较,各个MEL药物干预组细胞凋亡率均降低,且凋亡率随着MEL药物浓度的增高呈下降趋势,细胞凋亡率分别为:4%、51%、45%、32%、结论:本实验研究证实过氧化氢对RPE氧化损伤作用导致细胞活性降低、氧化还原功能减弱、细胞凋亡加速,MEL可以拮抗过氧化氢的氧化损伤,增强细胞的活性和氧化还原功能,抑制RPE凋亡的发生,对RPE起保护作用。为临床上应用MEL治疗与氧化损伤有关的视网膜疾病提够实验数据。

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