论文摘要
MicroRNAs（miRNAs）是一类长度约为21.25nt的单链非编码RNA,在转录后水平调节靶基因表达。有研究表明MicroRNAs参与发育、细胞增殖、分化等多种生理过程。在肿瘤的发生过程中很多miRNAs异常表达,可能发挥着癌基因或抑癌基因的作用。miR-155,定位于人染色体21q21,是BIC基因第三个外显子高度保守的区域编码的,在人类多种恶性肿瘤中高表达。有研究表明在很多肿瘤中miR-155作为癌基因发挥功能。胰腺癌是消化系统恶性肿瘤,症状隐匿,早期诊断困难,预后差。miR-155在胰腺癌中高表达,在胰腺癌发生过程中的作用尚无报道。本实验构建了miR-155的真核表达载体,进而做了初步的功能研究。载体构建是通过在pcDNA4.0/to/his/myc的多克隆位点区插入绿色荧光蛋白GFP和pre-miR155完成的。miR-155的前体以人类正常胰腺组织的基因组为模板进行PCR反应扩增,阳性的克隆通过PCR反应筛选。新的miR-155的真核表达载体被命名为pcDNA4.0-m155。为了进一步研究它的功能,本实验将重组质粒瞬时转染胰腺癌细胞系Panc-1和Miacapa-2。观察转染后细胞生物学行为的改变,同时检测K-RAS蛋白表达水平的变化。本研究发现转染miR-155的胰腺癌细胞具有更强的迁移浸润能力和生长能力。Western blot的结果显示过表达miR-155促进了K-RAS的表达,而RAS基因突变是人类恶性肿瘤中最常见的痛基因突变,与胰腺癌的发生发展密切相关,这些表明K-RAS有可能足miR-155的靶点之一。
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