天然抗体IgM 3B4体外抑制白念珠菌与宿主细胞相互作用的实验研究

论文摘要

天然抗体（natural antibodies, NAbs）是指正常机体在没有任何抗原刺激的情况下由胚系基因编码的,正常机体产生的针对一种或多种自身和（或）外源性抗原的抗体,具有多反应性和低亲和力的特征。自NAbs被发现以来,人们对其可能具有的功能进行了一系列的深入研究。研究结果表明,NAbs是构成机体天然免疫系统的重要组成部分,在肿瘤监视、自身免疫、异体排斥、抗感染等方面均发挥着重要的作用。近年来,随着抗生素、皮质类固醇激素、免疫抑制剂等的广泛应用,以及HIV感染者增加、异种移植术的开展、肿瘤发病率的上升,真菌感染呈明显上升趋势,特别是白念珠菌引起的感染明显上升,越来越引起人们的重视。人们逐渐认识到体液免疫在抗真菌感染中起着重要作用,而天然体液免疫又构成了机体抵御外来感染的第一道防线,天然抗体的作用逐渐引起人们的重视。虽然有部分事实表明天然抗体可能具有抗真菌免疫的作用,但还缺乏直接的证据,为此倍受医学界学者的广泛关注。本课题组在国家自然科学基金（30330510、30300318, 30330550, 30425015）的支持下,应用未免疫小鼠B细胞与骨髓瘤细胞融合,成功筛选到了3株分泌IgM型天然抗体的杂交瘤细胞,它们的可变区基因与胚系基因高度同源,其中以天然抗体IgM 3B4与抗原的结合活性最好,并且已经证实在体外天然抗体IgM 3B4可以调理吞噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬作用和天然抗体IgM 3B4可以与白念珠菌孢壁的糖蛋白抗原结合。本研究在前期工作的基础上利用纯化得到的天然抗体IgM 3B4,在体外以白念珠菌为对象,初步探讨天然抗体IgM 3B4抗真菌感染的作用机制。本研究利用纯化得到的天然抗体IgM 3B4在体外证实:1在体外,不同浓度的天然抗体IgM 3B4可以抑制白念珠菌芽管生成,2在体外,天然抗体IgM 3B4可以抑制白念珠菌与宿主细胞之间的粘附;3采用ELISA和RT-PCR方法检测了天然抗体IgM 3B4在体外对感染了白念珠菌的脐静脉血管内皮细胞IL-6、IL-8、ICAM-1和VCAM-1表达和分泌的影响,证实天然抗体IgM 3B4明显促进了脐静脉血管内皮细胞上述细胞因子的表达和分泌。从而证实了天然抗体IgM 3B4抵抗白念珠菌感染的能力与其抑制白念珠菌芽管生成、抑制白念珠菌与宿主细胞之间的粘附以及促进脐静脉血管内皮细胞IL-6、IL-8、ICAM-1和VCAM-1的表达和分泌有关。

论文目录

• 缩略语表
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• 文献回顾
• 正文
• 第一部分 天然抗体IGM 384 抑制白念珠菌型态转换及与宿主细胞间粘附的体外研究
• 1 材料与试剂
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要仪器设备
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要试剂配制
• 2 实验方法
• 2.1 白念珠菌酵母相培养
• 2.2 天然抗体IgM 384、4G2 的纯化
• 2.3 人角质形成细胞的培养、脐静脉内皮细胞的培养、人口腔粘膜上皮细胞的获取
• 2.3.1 人角质形成细胞的培养
• 2.3.2 脐静脉内皮细胞的培养
• 2.3.3 人口腔粘膜上皮细胞的获取
• 2.4 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌酵母相与人角质形成细胞、人口腔粘膜上皮细胞、脐静脉内皮细胞粘附的实验
• 2.4.1 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌酵母相与人角质形成细胞粘附的实验
• 2.4.2 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌酵母相与人口腔粘膜上皮细胞粘附的实验
• 2.4.3 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌酵母相与脐静脉内皮细胞粘附的实验
• 2.5 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌型态转换的实验
• 2.5.1 白念珠菌最佳芽管诱导时间的确定
• 2.5.2 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌型态转换
• 2.6 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌与角质形成细胞的粘附
• 3.2 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌与人口腔粘膜上皮细胞的粘附
• 3.3 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌与脐静脉内皮细胞的粘附
• 3.4 天然抗体IgM 384 抑制白念珠菌型态转换
• 4 讨论
• 第二部分 天然抗体IGM 384 对EVC304 脐静脉血管内皮细胞感染白念珠菌后相关细胞因子表达的影响
• 1 材料与试剂
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要仪器设备
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要试剂配制
• 2 方法
• 2.1 白念珠菌酵母相培养
• 2.2 天然抗体IgM 384、4G2 的纯化
• 2.3 脐静脉血管内皮细胞的培养
• 2.4 天然抗体IgM 384 对白念珠菌感染脐静脉血管内皮细胞的作用
• 2.5 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 ELISA 结果
• 3.1.1 EVC304 脐静脉血管内皮细胞IL-6 蛋白水平的变化
• 3.1.2 EVC304 脐静脉血管内皮细胞IL-8 蛋白水平的变化
• 3.1.3 EVC304 脐静脉血管内皮细胞ICAM-1 蛋白水平的变化
• 3.1.4 EVC304 脐静脉血管内皮细胞VCAM-1 蛋白水平的变化
• 3.2 RT-PCR 结果
• 3.2.1 EVC304 脐静脉血管内皮细胞IL-6 mRNA 水平的变化
• 3.2.2 EVC304 脐静脉血管内皮细胞IL-8 mRNA 水平的变化
• 3.2.3 EVC304 脐静脉血管内皮细胞ICAM-1 mRNA 水平的变化
• 3.2.4 EVC304 脐静脉血管内皮细胞VCAM-1 mRNA 水平的变化
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和攻读学位期间发表文章题录
• 致谢