转AtNHX1基因杨树的培育及其耐盐性的鉴定

论文摘要

本研究以欧美杨107茎段为材料，建立高效组培再生体系，确立了适宜的茎段再生不定芽的培养基和生根培养基。采用根癌农杆菌介导法，将拟南芥Na+／H+逆向转运蛋白（Na+／H+ antiporter）基因（AtNHX1）首次转入杨树，并进行了功能验证。本实验研究得出茎段分化的最适培养基为MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1NAA，分化率为100％，这为遗传转化工作提供了坚实的基础。遗传转化过程中卡那霉素作为遗传转化的筛选剂，它的最佳浓度为70 mg·L-1；农杆菌LBA4404的最适浓度是OD600=0.5，侵染10～15 min；外植体预培养2 d，共培养2 d。对再生植株进行PCR检测、PCR产物基因测序和杨树基因组DNA的Southern检测，证实已获得126株转AtNHX1基因的杨树植株。转基因植株的功能验证表明，在不同浓度的NaCl的处理下，植物的净光合速率、蒸腾速率、叶绿素荧光、均呈下降趋势，但是植株的转基因植株下降的速率要明显小于非转化植株。在盐处理下，非转化植株的细胞膜透性要强于转化植株，其根和叶片中的Na+含量也高于转基因植株。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 转基因杨树的研究进展
• 1.1 转基因杨树的发展概况
• 1.2 遗传转化方法
• 1.3 转基因植株的筛选与检测
• 2 植物抗盐碱机理
• +/H⁺逆向转运蛋白和植物耐盐性'>3 Na⁺/H⁺逆向转运蛋白和植物耐盐性
• +/H⁺逆向转运蛋白的细胞和染色体定位'>3.1 Na⁺/H⁺逆向转运蛋白的细胞和染色体定位
• +/H⁺逆向转运蛋白的功能'>3.2 Na⁺/H⁺逆向转运蛋白的功能
• +/H⁺逆向转运蛋白活性'>3.3 盐胁迫与Na⁺/H⁺逆向转运蛋白活性
• 4 杨树耐盐碱研究进展
• 5 本研究的目的及意义
• 第二章 欧美杨107高频再生体系的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2）对无菌苗生长的影响'>2.1 升汞（HgCl₂）对无菌苗生长的影响
• 2.2 不同外植体和不同激素对不定芽诱导的情况
• 2.3 试管苗的生根
• 3 讨论
• 3.1 外植体培养时褐变现象的消除
• 3.2 继代增殖过程中的玻璃化现象
• 3.3 欧美杨107叶片再生系统的建立及评价
• 第三章 转AtNHX1杨树的获得及其分子检测
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 卡那霉素Kan敏感性实验
• 2.2 农杆菌侵染时间对抗性芽获得的影响
• 2.3 预培养度对遗传转化的影响
• 2.4 共培养时间的转化的影响
• 2.5 抗性植株的获得
• 2.6 抗性苗的PCR检测
• 2.7 PCR产物测序
• 2.8 PCR阳性植株的Southern检测
• 2.9 转基因植株的移栽
• 3 讨论
• 第四章 转AtNHX1基因杨树植株的功能验证
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同NaCl处理对杨树生长发育的影响
• 2.2 不同NaCl处理对细胞膜渗透势的影响
• 2.3 不同NaCl处理对叶绿素荧光参数的影响
• 2.4 不同NaCl处理对杨树净光合速率和蒸腾速率的影响
• 2.5 不同NaCl处理杨树根和叶横切面上X-射线能谱微区分析
• 3 讨论
• 第五章 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文