猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备及初步应用

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的新型传染病。临床症状以感染猪发热、厌食和妊娠母猪流产、死产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为主要特征。自1987年首次暴发该病以来，目前已遍布全世界，给世界各国养猪业造成了巨大的经济损失。单克隆抗体是20世纪70年代诞生的一项生物高新技术，应用免疫学的抗体产生机理和细胞瘤杂交技术，获得单一抗原决定簇的高度均一相应抗体，该种抗体特异性好、敏感性高，与多克隆血清相比，具有明显的优势。目前，研究的重点在于如何将特定的单克隆抗体创造性的应用于不同领域而实现其应用价值。本实验选用Balb／c小鼠作为实验动物，采用SephadexG200层析柱法提纯的PRRSV，将提纯的PRRSV与等体积的弗氏佐剂充分混匀免疫小鼠，融合前三天加强免疫一次，取脾细胞与SP2／0细胞进行融合，筛选杂交瘤细胞系，共144个孔有融合细胞，融合率为52.17％，用间接ELISA法进行筛选共获得11孔阳性孔，阳性率为7.64％，经有限稀释法3次克隆，获得三株稳定分泌PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2B7、5F9和3G2，其纯化腹水ELISA效价分别为1：1.28×106、1：6.4×105、1：3.2×105。三株单抗的亚类均为IgG1型。最后对获得的三株单克隆抗体的特异性、稳定性进行了鉴定，结果证明三株单抗均有很好的特异性和稳定性。灵敏的ELISA检测方法的建立，为检测PRRS提供了一种行之有效的方法，对PRRSV的诊断、免疫学的研究具有重要意义和应用价值。本实验用PRRSV免疫兔制备兔抗PRRSV多克隆抗体，并用饱和硫酸铵沉淀法纯化IgG。将纯化的多克隆抗体作为包被抗体，将用HRP（辣根过氧化物酶）标记的McAb2B7作为酶标抗体，建立双夹心ELISA检测法。实验对多克隆抗体的最佳包被浓度和酶标单抗的最佳工作浓度进行了测定，结果分别为7.08μg／ml（1：800倍稀释）和2.96μg／ml（1：1600倍稀释）。该检测方法具有特异、灵敏、可靠、快捷等优点，且该方法不需要特殊设备和技术，便于推广。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 病原学
• 2 流行病学
• 3 临床症状
• 4 病理变化
• 5 诊断
• 6 PRRSV的防制
• 7 单克隆抗体在PRRS防治中的应用
• 8 研究的目的和意义
• 实验一 猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备
• 1 材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 实验二 双抗体夹心ELISA检测方法的建立
• 1 材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 1 单克隆抗体制备的主要试剂配制
• 2. 双抗体夹心ELISA制备的主要试剂配制
• 致谢
• 作者简历