赤芝与紫芝种间杂交

论文摘要

本研究通过原生质体单核化技术分别获得赤芝和紫芝的单核菌株,随后进行单单杂交以获取不同于亲本的杂交菌株。随后对获取的杂交菌株进行形态学和分子标记鉴定,并通过生物学特性和药用成分分析筛选出具有杂交优势的灵芝杂交菌株。1.亲本的选择及单核菌株的制备结合实验室已有的灵芝相关实验数据,我们挑选出3株赤芝和4株紫芝菌株作为种间杂交实验的亲本菌株。随后通过原生质体单核化技术分别获取了不同交配型的赤芝单核菌株22株和紫芝单核菌株39株,并进行了相应的交配型测定。2.单单杂交实验将不同交配型的赤芝与紫芝单核菌株进行单单杂交,共计858个配对组合,共获得8株赤芝与紫芝的种间杂交菌株,其配对成功率为0.9324%。3.杂交菌株的鉴定首先,利用锁状联合的观察、核染色以及拮抗反应等方法对获得的杂交菌株进行初步鉴定,随后又通过ITS酶切、SRAP和RAPD等分子标记的方法对杂交菌株进行进一步的验证,实验结果显示杂交菌株明显不同于两株双核亲本菌株,其遗传物质分别源自于两株不同的单核亲本菌株。4.杂交菌株生物学特性的研究通过对所获得的杂交菌株的温度、pH值、生长速度和栽培管性状等四个方面进行分析比较,结果显示：杂交菌株03+1-51×07-5在30℃下菌丝生长速度最快；达到4.68mm/d；杂交菌株03+1-18×07-42在pH7时菌丝生长速度最快,达到4.50mm/d；杂交菌株12-71×05-1是在生长管中最快的,达到10.05mm/d；杂交菌株12-77×05-1在栽培料中的生长速度最快,达到3.36mm/d；显示出杂交菌株与亲本之间的显著差异。5.多糖、三萜含量的测定将所获的杂交菌株通过菌丝和子实体多糖及三萜含量的测定来进行进一步的评价,实验结果显示,杂交菌株12-77×05-1在多糖和三萜类含量等方面都明显优于亲本和其他杂交菌株。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 文献综述
• 第一节 灵芝概述
• 1 灵芝的历史文化
• 2 灵芝的生活史
• 3 赤芝、紫芝概述
• 3.1 赤芝概述
• 3.2 紫芝概述
• 4 灵芝的功效研究现状
• 4.1 灵芝多糖
• 4.2 三萜类成分
• 第二节 食用菌育种概述
• 1 驯化育种
• 2 孢子分离育种
• 3 诱变育种
• 4 杂交育种
• 4.1 单单杂交
• 4.2 双单杂交
• 4.3 多孢杂交
• 第三节 食用菌杂交品种的鉴定
• 1 形态学方法
• 2 细胞学方法
• 2.1 显微镜观察
• 2.2 拮抗反应
• 3 分子标记鉴定
• 3.1 RFLP
• 3.2 RAPD
• 3.3 AFLP
• 3.4 SRAP
• 3.5 SCAR
• 第四节 灵芝研究的发展方向展望
• 第二章 亲本选择以及原生质体的制备
• 第一节 亲本选择
• 1 子实体表型遗传性状差异比较
• 2 遗传距离
• 2.1 AFLP聚类分析
• 2.2 ITS聚类分析
• 第二节 原生质体制备
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试培养基及试剂
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 对原生质体产量的影响
• 2.2 原生质体的再生
• 3 小结
• 第三章 灵芝交配型因子测定
• 第一节 单核菌株交配型测定
• 1 材料与方法
• 1.1 供试培养基
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 单核菌株的获得
• 2.2 单核菌株与亲本菌株的菌落形态比较
• 2.3 交配型测定结果
• 3 小结
• 第二节 不同菌株间交配型因子的测定
• 1 材料与方法
• 1.1 供试实验菌株
• 1.2 供试培养基
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 交配型因子测定结果
• 2.2 不同交配型单核菌株的形态差异
• 3 小结
• 第四章 灵芝杂交及杂交菌株的验证
• 第一节 灵芝种间配对杂交及杂交菌株纯化
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 供试培养基
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 赤芝与紫芝单核菌株杂交配对结果
• 2.2 纯化杂交菌株结果
• 3 小结
• 第二节 杂交菌株的验证
• 1 材料与方法
• 1.1 供试实验菌株
• 1.2 供试培养基及试剂
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 菌丝形态比较
• 2.2 显微观察结果
• 2.3 拮抗反应
• 2.4 分子标记验证结果
• 3 小结
• 第五章 杂交菌株生物学特性及有效成分研究
• 第一节 温度对灵芝菌丝生长速度的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株以及培养基
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 3 小结
• 第二节 pH梯度对灵芝菌丝生长速度的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基及试剂
• 1.3 实验方法
• 2 结果与分析
• 3 小结
• 第三节 生长管中菌丝生长速度
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株以及培养基
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 3 小结
• 第四节 栽培料中菌丝生长速度比较
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株以及培养料
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 在不同含水量栽培料中的菌丝生长速度比较
• 2.2 在不同酸碱度栽培料中的菌丝生长速度比较
• 3 小结
• 第五节 杂交菌株有效成分比较
• 1 实验材料
• 1.1 供试菌株与培养基
• 1.2 供试试剂
• 2 实验方法
• 2.1 菌丝体获得
• 2.2 多糖测定
• 2.3 三萜测定
• 3 结果与分析
• 4 小结
• 第六节 杂交菌株出芝实验
• 1 材料与方法
• 1.1 实验菌株
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 出芝结果
• 2.2 产量及成分含量测定
• 3 小结
• 参考文献
• 致谢