论文摘要
背景：神经母细胞瘤是儿童外周神经系统最常见的恶性肿瘤。大量研究表明MYCN在决定NB预后的因素中占据重要地位，MYCN基因超量表达时，预后不良；低表达时预后较好，MYCN基因可以作为神经母细胞瘤基因治疗的靶点。建立动物模型，探索体内基因治疗的疗效及其它相关问题具有重要意义。目的：建立神经母细胞瘤皮下移植瘤动物模型，探索以叶酸受体为靶向的脂质体包裹MYCN siRNA体内对瘤组织MYCN基因表达水平的影响。方法：选择SCID小鼠10只，将培养的神经母细胞瘤LA-N-5细胞悬液0.5ml（1×107／ml）注射于右前腋部皮下，建立神经母细胞瘤皮下移植瘤动物模型。另选择SCID小鼠28只制备神经母细胞瘤皮下移植瘤动物模型，按每组14只随机将动物分为2组，空白对照组、叶酸包裹脂质体MYCN siRNA组（实验组）。当肿瘤组织直径在0.5cm左右时，空白对照组和实验组分别随机采用脱臼法处死4只SCID鼠，测量治疗前MYCN mRNA表达水平。剩余SCID鼠，实验组局部瘤组织中注射叶酸包裹脂质体MYCN siRNA，剂量为3.5mg／kg，每天一次，连续三天，空白对照组相同部位、相同时间注射等量生理盐水，末次注射3小时后脱臼法处死动物，取肿瘤组织，提取总RNA。采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ（SYBR GREENⅠ）实时定量RT-PCR体系测定肿瘤组织中的MYCN、GAPDH基因mRNA拷贝数，MYCN mRNA表达水平用MYCN copies／GAPDH copies表示。结果：1．所有动物在注射后5-6天可在右前腋皮下触及小包块，8天肿瘤组织的平均体积为4.6±2.9mm3，移植瘤动物模型制作成功，成瘤率100％。光镜下检查肿瘤细胞聚集成团，伴有癌结节形成，癌细胞形状不规则，分化差异明显，胞质少，核大，深染，不规则，核仁明显，可见菊团状生长，分化低，NSE（+）；2．实验前，空白对照纽和实验组动物瘤组织MYCN mRNA分别为17.8±2.3和17.5±0.9，实验结束后空白对照组和实验组动物瘤组织MYCNmRNA表达水平为18.1±4.6和8.8a±3.5，经t检验，实验前两组间t值=0.3，p=0.7967，p＞0.05，实验后两组间t值=4.8，p=0.001，p＜0.05。结论：1．在SCID小鼠右前腋皮下接种神经母细胞瘤LA-N-5细胞悬液0.5ml（1×107／ml）可成功复制神经母细胞瘤移植瘤动物模型；（2）以叶酸受体为靶向的脂质体MYCN siRNA体内可明显抑制瘤组织MYCN mRNA水平的表达。