葡萄组织培养生产白藜芦醇的研究

论文摘要

白藜芦醇是植物在抵御真菌侵染、机械和紫外线等伤害时产生的植保素次生代谢产物,有防癌、保护心血管系统、抗菌和调节血脂等多种对人体有益的作用。本文以葡萄特别是其果皮为外植体诱导愈伤组织,对其白藜芦醇的生物合成、积累规律及影响因素进行系统地研究。取得的主要结果如下:1.利用高效液相色谱（HPLC）建立了葡萄中白藜芦醇的测定方法,实现了对葡萄中的白藜芦醇含量快速、准确和有效的分析。检测了不同品种和不同器官中及其不同生长阶段白藜芦醇的含量2.选取白藜芦醇含量较高的葡萄器官作为外植体进行愈伤组织诱导,筛选出了最佳诱导愈伤组织的培养基配方。结果表明外植体与其愈伤组织中白藜芦醇的含量相差不大。筛选出了以Y6为外植体诱导出了生长势强,含白藜芦醇较高的愈伤组织。3.利用组织培养技术结合现代分析测试手段,系统研究了碳源、生长调节剂、有机添加物和前体物,采用HPLC测定愈伤组织中白藜芦醇的含量的变化,根据葡萄愈伤组织的生物量及其白藜芦醇的含量,确定了葡萄愈伤组织生长和进行其有效成分生物合成的最佳条件:在光培养下,培养基B5中附加40g/L蔗糖,6mg/L NAA,0.6mg/L6-BA和150mg/L蛋白胨,温度25℃。在上述条件下,转接新鲜愈伤组织,培养24d后,葡萄皮愈伤组织生物量干重为50.27g/L,白藜芦醇为438.143μg/g,白藜芦醇总含量为22.025mg/L。白藜芦醇的含量和产量分别是对照的2.4倍和2.6倍。4.研究了紫外线（uV）辐射对愈伤组织中白藜芦醇合成的诱导作用,结果表明,用15W 254nm波长的紫外灯距离灯管25cm照射葡萄愈伤组织30min,可使白藜芦醇含量提高5倍。研究了一定浓度的苯丙氨酸作为前体,能提高葡萄皮愈伤组织中白藜芦醇的含量,是对照组的2.1倍

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 白藜芦醇研究进展
• 1.1 白藜芦醇在植物中的分布和含量
• 1.2 白藜芦醇的生理功能
• 1.3 白藜芦醇的提取、纯化与检测
• 1.4 白藜芦醇的生产途径
• 1.5 白藜芦醇的应用前景
• 1.6 白藜芦醇的发展前景
• 2 植物细胞培养技术及次生代谢产物的生产研究进展
• 2.1 植物细胞培养技术的发展
• 2.2 影响植物细胞培养次生代谢产物的因子
• 3 本研究的目的和意义
• 第二章 高含白藜芦醇葡萄资源的筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验仪器和试剂
• 1.3 测定方法
• 2 结果
• 2.1 精密度及稳定性试验
• 2.2 回收率试验
• 2.3 不同葡萄品种中叶片、茎段和果皮中白藜芦醇的比较
• 3 讨论
• 3.1 葡萄不同组织中白藜芦醇含量和利用
• 3.2 利用高效液相色谱测定葡萄器官中白藜芦醇的可行性
• 第三章 葡萄愈伤组织的诱导培养及白藜芦醇含量测定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同培养基和不同浓度生长调节物质对愈伤组织诱导效果的比较
• 2.2 不同材料诱导的愈伤组织白藜芦醇含量的检测
• 2.3 巨峰葡萄果皮愈伤组织中高产白藜芦醇细胞的筛选
• 2.4 愈伤组织生长曲线和生长变化
• 2.5 不同时期愈伤组织中白藜芦醇含量变化
• 3 讨论
• 3.1 不同葡萄品种器官愈伤组织的诱导
• 3.2 葡萄皮愈伤组织的生长量与其次生代谢产物产量之间的相关性
• 第四章 培养基成分对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇含量的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同碳源对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累量的影响
• 2.2 不同浓度蔗糖对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累量的影
• 2.3 生长调节物质对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累量的影响
• 2.4 氮源对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累量的影响
• 2.5 有机添加物对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累量的影响
• 3 讨论
• 3.1 巨峰葡萄果皮愈伤组织最佳培养基成分的确定
• 3.2 综合最佳培养条件下巨峰葡萄果皮愈伤组织的培养
• 第五章 非生物诱导因子和前体物对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和藜芦醇含量的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 紫外线照射对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累量的影响
• 2.2 L-苯丙氨酸对巨峰葡萄果皮愈伤组织生长和白藜芦醇积累的影响
• 3 讨论
• 3.1 紫外线照射的影响
• 3.2 前体物L-苯丙氨酸的影响
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 图版及图版说明