论文摘要
目的建立OPG（osteoprotegerin,OPG）转基因小鼠模型,观察其骨微结构、骨密度和骨矿含量的变化,以探讨OPG在体内调节骨代谢的作用及其分子机理。方法构建带人类OPG基因启动子的真核表达载体pCI-hOPGp-mOPG,显微注射入C57BL∕6J小鼠受精卵原核,导入假孕母鼠输卵管后培养子代小鼠。通过PCR法鉴定小鼠基因型,获得OPG转基因小鼠模型（OPG transgenic mouse ,OPG trans ）。取SPF级10周龄F2代OPG trans鼠和野生型小鼠（C57BL∕6J）各4只,Western Blot测定小鼠OPG蛋白表达;μCT观察小鼠胫骨近端松质骨和皮质骨的骨微结构;同时应用DXA测定小鼠股骨总体骨密度和骨矿含量值。结果1.构建携带分子标签Flag的表达载体pCI-hOPGp-mOPG质粒经酶切与测序,鉴定序列正确。在69只原代小鼠中,有7只转基因阳性Founder小鼠。目前F4代34只小鼠中,有4系共5只转基因阳性小鼠。2.与野生型小鼠比较,OPG转基因小鼠胫骨松质骨微结构参数体积骨密度、组织骨密度、骨小梁厚度和骨小梁数目均明显增加,而骨小梁间隔则明显减小;皮质骨微结构参数皮质骨面积、皮质骨厚度、皮质骨密度、皮质骨矿含量明显增加,而内径周长则明显减小（P<0.05）,外径周长间无显著差异。股骨骨密度与骨矿含量值均明显上升（P<0.05）。结论1.成功建立携带分子标签Flag的OPG转基因小鼠模型。2.OPG转基因小鼠皮质骨和松质骨的骨量均增加。