通冠胶囊后适应对急性心肌缺血再灌注损伤心肌保护作用及机制的研究

论文摘要

研究目的:1.通过随机双盲安慰剂对照的方法,研究通冠胶囊药物后适应在急性心肌梗死（acutemyocardial infarction,AMI）行急诊冠脉介入治疗（percutaneous coronaryintervention,PCI）患者心脏保护作用的疗效。2.通过制备大鼠心肌缺血再灌注模型,并在此基础上研究通冠胶囊不同剂量后适应以及缺血后适应方法对大鼠心肌梗死程度、心肌细胞凋亡状况的影响及作用机制。方法:1.临床研究:采用随机双盲安慰剂对照的方法,将60名急性心肌梗死欲行急诊PCI的患者分为两组（n=30）,术前对照组给予西药的常规治疗+安慰剂,治疗组给予西药常规治疗+通冠胶囊4.5g。观察（1）术前及术后2h、6h、12h、24h、48h、72h血清肌酸激酶（creatinkinase,CK）、肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、血清肌钙蛋白I（troponin I,TnI）的水平;（2）术前及术后2h血浆丙二醛（malonaldehyde,MDA）、超氧化物歧化酶SOD（superoxide dismutase,SOD）水平;（3）术后2h心电图ST段回落情况;（4）术前及术后72h行心脏超声检查,检测左室射血分数（left ventricular ejectionfraction,LVEF）以及室壁运动指数,并观察NYHA心功能分级。（5）观察术后72h不良反应的发生率。2.实验研究:采用结扎心脏左前降支的方法制备大鼠心肌缺血再灌注模型,并随机分为6组（n=12）,假手术组（sham operation,SO）、心肌缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）模型组、心肌缺血后适应组（ischemia postconditioning,IPC）,以及通冠胶囊0.25g/kg（low dose,LD）、0.5g/kg（moderate dose,MD）、1g/kg（high dose,HD）三个组。实验结束后每组半数行NBT染色法及称重法测定心肌梗死范围;半数进行病理染色分析及免疫组化法测定BCL-2蛋白及BAX蛋白表达;并行TUNEL染色测定凋亡指数;抽血检测CKMB水平,心尖部心肌组织测MDA及SOD水平;测量术前及术后的血流动力学指标;记录心律失常积分。结果:1.临床研究:（1）血清CK值,治疗组在术后2h、6h、24h及48h时间点显著低于对照组（均p＜0.05）,其余时间点有降低但无统计学差异（均P＞0.05）;CKmb值,治疗组在术后2h、12h、24h及48h时间点显著低于对照组（均p＜0.05）其余时间点有降低但无统计学差异（均P＞0.05）;TnI值,治疗组在术后6h、12h、24h、48h及72h时间点显著低于对照组（均p＜0.05）。（2）术后2h治疗组MDA含量低于对照组（P＜0.05）,血浆SOD水平高于对照组（P＜0.05）。（3）术后72h,两组LVEF及室壁运动积分均较术前改（均P＜0.05）,说明PCI术可明显改善患者心功能,且通冠胶囊治疗组较对照组可进一步改善LVEF及室壁运动积分（P＜0.05）;4.对照组室性心律失常发生率为43.3%（13/30）,高于治疗组的室性心律失常发生率为16.7%（5/30）（P＜0.05）;对照组梗死后心绞痛发生率为36.7%（11/30）,高于治疗组的13.3%（4/30）（P＜0.05）;两组心功能不全的发生率分别为40%（12/30）与36.7%（11/30）,无统计学差异（P＞0.05）。2.动物实验:（1）I/R组、IPC组、LD组、MD组及HD组心肌细胞受到明显损伤,与SO组比较血清CK水平明显增高（均P＜0.01）;IPC组及HD组血清CK较I/R组明显降低（P＜0.01）,二者之间比较无统计学差异（p＞0.05）;IPC组及HD组血清CK较LD及MD组明显降低（p＜0.05）;（2）与SO组相比较,其余各组在缺血30分钟及再灌注120分钟2个时点LVSP及±dp/dtmax均可见明显降低（P＜0.01）,但缺血30分钟其余各组间无明显差异;再灌注120分钟时点IPC组及通冠胶囊HD组LVSP均高于I/R组（P＜0.05）,±dp/dtmax均明显高于I/R组（P＜0.01）;通冠胶囊MD组在120分钟时点LVSP及+dp/dtmax均高于I/R组（P＜0.05）,但-dp/dtmax与之相比无明显改善,且与IPC及HD组相比具有统计学差异。LD组各项数值均有改善趋势但无统计学意义。（3）与SO组相比较,各组的梗死范围均明显增加（P＜0.01）,表明心肌缺血再灌注模型成功。其中,与I/R相比较,IPC组与通冠胶囊HD组均可明显降低心肌梗死范围（p＜0.01）,且二者之间比较无明显差异（p＞0.05）;（4）SO组几乎无心律失常发生,仅有2例偶发室早;I/R组再灌注期心律失常发生率高,其中室速发生11例（73%）,室颤发生3例（20%）,三例均死亡而退出研究,心律失常积分为5.46±2.21;IPC组有6例在再灌注早期发生室速（50%）,但经缺血后适应后均可恢复正常节律,无室颤发生,心律失常积分为:2.66±1.23,低于I/R组（P＜0.01）;通冠胶囊LD组室速发生7例（58%）,室颤1例（8%）,后可恢复,无动物死亡,心律失常积分3.83±1.85,与I/R组及IPC组无显著性差异（P＞0.05）;MD组室速发生5例（41%）,室颤发生2例（12.5）,无动物死亡,心律失常积分:4.6±1.85,与I/R组相比具有显著性差异（p＜0.05）;HD组室速发生6例（50%）,无室颤发生,心律失常积分:3.33±1.37,与I/R组比较有统计学差异（p＜0.05）;MD组及HD组与IPC组三组之间相比较心律失常发生无显著性差异（均p＞0.05）。（5）SO组仅个别细胞凋亡;I/R组凋亡的心肌细胞明显增加,通冠胶囊LD组凋亡的心肌细胞数量也较多,呈弥漫分布;IPC组、通冠胶囊MD组、HD组凋亡的心肌细胞数减少,IPC组、通冠胶囊MD组、HD组凋亡细胞呈散在分布;与IR组相比,IPC组、通冠胶囊MD组、HD组凋亡细胞数减少,差异性显著（P＜0.05）,IPC组、通冠胶囊MD组、HD组凋亡细胞数减少三组之间比较无显著性差异（P＞0.05）,IP01组与IP02组相比差异性显著（P＜0.05）。（6）与SO组相比较,其余各组反应心肌氧化损伤的心肌组织脂质过氧化产物MDA含量增加,SOD活性降低,差异均有显著性意义（P＜0.01）;与IR组相比,IPC组、MD组、HD组心肌MDA含量下降、SOD活性升高,差异性显著（P＜0.05）,IPC组、MD组与HD组三组之间比较无显著性差异（P＞0.05）;（7）与SO组相比较,其余各组BCL-2及BAX蛋白表达均明显上升,具有显著性差异（P＜0.01）。IPC组、MD组及HD组BCL-2蛋白表达均高于IR组（P＜0.01）;IPC组BAX蛋白表达低于IR组（P＜0.01）;LD组、MD组、HD组与IR组之间BAX蛋白表达无显著性差异（P＞0.05）。结论:1.通冠胶囊后适应在急性心肌缺血再灌注损伤中具有心脏保护作用;2.通冠胶囊后适应的心肌保护作用可通过降低局部氧自由基生成,升高BCL-2蛋白表达,提高BCL-2/BAX比值,抑制心肌细胞凋亡实现。3.通冠胶囊后适应可部分起到模拟缺血后适应的作用,且作用程度与剂量具有相关性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 临床研究
• 通冠胶囊后适应对AMI患者介入治疗I/R损伤保护作用的随机、双盲、安慰剂对照研究
• 第一节 对象与方法
• 1 研究对象
• 2 临床参照标准
• 3 研究方法
• 第二节 结果
• 1 病例一般资料
• 2 冠脉造影及PCI结果
• 3 通冠胶囊后适应对AMI患者I/R心肌损伤标志物的影响
• 4 术后心电图的改变
• 5 两组患者心功能检查结果
• 6 PCI术后72h内不良事件事件发生情况
• 第三节 讨论
• 第二部分 动物实验
• 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制的研究
• 第一节 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 第二节 结果
• 1 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌酶的影响
• 2 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌梗死范围的影响
• 3 心肌组织病理形态观察
• 4 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤血流动力学的影响
• 5 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心律失常的影响
• 6 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响
• 7 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌MDA、SOD的影响
• 8 通冠胶囊后适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌BCL-2、BAX蛋白表达的影响
• 第三节 讨论
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 附录一: 统计图
• 附录二: 照片
• 附录三: 病例报告表
• 在读期间科研情况
• 致谢