重组人P53腺病毒液对人卵巢癌细胞株生长抑制及凋亡的作用研究

论文摘要

在卵巢癌中,P53基因的突变是最常见的基因改变之一。30%～79%卵巢癌中出现了P53基因的突变。目前,野生型P53基因替代疗法是肿瘤基因治疗的研究热点,而重组人P53腺病毒液则是最常用的治疗方式。有研究表明,导入野生型P53基因,能明显抑制肿瘤细胞的生长,促进细胞凋亡,增加肿瘤细胞对化疗的敏感性。因此,本课题利用人卵巢癌细胞株SKOV-3及CAOV-3,研究重组人P53腺病毒液对卵巢癌细胞的生长抑制及凋亡诱导的作用。目的与背景:探讨研究重组人P53基因腺病毒液（rAd-P53）对卵巢腺癌细胞株的生长及化疗敏感性的影响。方法:将rAd-P53携带的外源性P53基因导入卵巢癌细胞株SKOV-3及CAOV-3,并联合应用化疗药物DDP,通过Western blot法分析P53基因在肿瘤细胞中的表达,通过MTT法、流式细胞方法观察肿瘤细胞生长、凋亡及细胞周期的影响。1.利用MTT方法比较不同时间、不同滴度rAd-P53对人卵巢癌细胞株CAOV-3、SKOV-3的体外生长抑制率,比较rAd-P53、DDP以及两者联合用药对卵巢肿瘤细胞的体外生长抑制率,比较联合用药时不同用药顺序对卵巢肿瘤细胞的体外生长抑制率的影响;2.利用流式细胞方法比较rAd-P53、DDP以及两者联合用药作用于卵巢肿瘤细胞72h后肿瘤细胞的细胞周期及细胞凋亡率;3.利用Western blot方法检测rAd-P53作用于卵巢肿瘤细胞72h后P53蛋白的表达。结果:1.rAd-P53对人卵巢癌细胞株CAOV-3及SKOV-3的体外生长抑制作用均呈现明显的时间依赖性、剂量依赖性关系。联合用药与rAd-P53、DDP单药用药相比,对卵巢肿瘤细胞的体外生长抑制作用更显著（CAOV-3:联合用药73.57±0.43%,DDP 52.05±2.13%,rAd-P53 45.53±0.95%,P＜0.01;SKOV-3:联合用药74.70±0.86%,DDP 59.46±1.17%,rAd-P53 50.72±2.04%,P＜0.01）。联合用药时不同的用药顺序对肿瘤细胞体外生长抑制作用无明显差异（P＞0.6）。2.联合用药72h后,肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期CAOV-3:67.47±1.03%,SKOV-3:67.26±2.37%,与对照组、DDP组比较有统计学差异（CAOV-3:对照组41.58±1.72%,DDP组36.87±6.53%;SKOV-3:对照组41.68±3.51%,DDP组48.36±9.34%,P＜0.01）,S期比例明显减少,CAOV-3:32.51±1.06%,SKOV-3:32.53±2.32%,与对照组、DDP组、rAd-P53组比较均有统计学差异（CAOV-3:对照组54.65±2.79%,DDP组45.98±8.38%,rAd-P53组36.10±3.67%;SKOV-3:对照组54.94±0.65%,DDP组44.88±6.11%,rAd-P53组37.11±1.20%,P＜0.01）,且细胞凋亡率CAOV-3达到19.39±1.67%,SKOV-3达到38.12±1.83%,与对照组、DDP组、rAd-P53组比较均有统计学差异（CAOV-3:对照组0.19±0.13%,DDP组6.61±0.49%,rAd-P53组2.61±0.20%;SKOV-3:对照组0.12±0.85%,DDP组8.52±0.47%,rAd-P53组5.70±0.47%,P＜0.01）。3.Western blot检测rAd-P53作用于卵巢肿瘤细胞CAOV-3及SKOV-3 72h后,比较未用药物的肿瘤细胞,有明显的P53蛋白表达。结论:rAd-P53能将外源性野生型P53基因导入肿瘤细胞的基因组,使肿瘤细胞表达P53蛋白,从而使肿瘤细胞细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞体外生长,促进细胞凋亡。rAd-P53与常规化疗药物DDP联合应用能显著增加肿瘤细胞对DDP化疗的敏感性,其抗肿瘤效应较DDP、rAd-P53单药应用更加显著。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 rAd-P53及DDP对卵巢癌细胞株的生长抑制作用研究
• 主要材料
• 方法
• 结果
• 第二部分 rAd-P53联合DDP对卵巢癌细胞的细胞周期及凋亡率的影响
• 主要材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述