猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞联合培养体系建立及生长特性初步研究

论文摘要

脂肪组织与肌肉组织通过旁分泌、内分泌产生相互作用，参与机体脂肪沉积与肌肉发育过程，在物质与能量代谢过程中具有重要调节功能，建立脂肪细胞与肌细胞的联合培养体系，有助于研究两类细胞间的作用关系。本实验以初生健康长白仔猪为实验动物，分离、纯化前体脂肪细胞与骨骼肌肌卫星细胞，采用MTT比色、油红O染色、Desmin免疫组化、HE染色和半定量RT-PCR等方法，建立了一种猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞体外直接联合培养的适宜体系，并对联合培养细胞的增殖分化等生长特性进行了初步研究，得出如下研究结果：1．比较了接种浓度比对联合培养细胞增殖率的影响。在13个接种浓度比中，MTT比色结果显示，当前体脂肪细胞与肌卫星细胞以2.5×107个／L与1×108个／L接种时，联合培养细胞在测定第9天的增殖率可达到最大。2．分析了贴壁时间对联合培养细胞存活率的影响。随培养时间的延长，联合培养细胞贴壁率增大，但在48～66 h间趋于稳定，66 h后部分细胞进入增殖分裂期。3．研究了培养基及血清浓度对联合培养细胞存活率的影响。细胞贴壁率结果显示，有血清培养基较无血清培养基有利于细胞的存活，其中DMEM／F12（1：1）培养基较DMEM、RPMI及M199培养效果好，联合培养细胞存活率在10～200 mL／L的范围内呈浓度依赖性。4．分析了联合培养细胞生长形态与增殖特性的变化。形态学动态观察、2～9天MTT比色结果显示，联合培养细胞贴附后呈纤维样伸展延伸，增殖率高于单独两类细胞，但接触汇合后交织重叠生长，7～9天维持缓慢的增殖过程，进入平台期较单独两类细胞晚。5．形态学观察联合培养对脂肪细胞与肌细胞分化过程的影响。油红O染色、HE染色结果显示，联合培养细胞中仅观察到极少量的小脂滴，且呈现较晚；多核肌细胞形成与肌管的融合在联合培养中显著，但没有单独肌细胞明显，且形成较晚；6．分子水平RT-PCR检测联合培养对脂肪细胞与肌细胞分化过程的影响。第5、10天的联合培养细胞皆表达LPL、Myf5mRNA，并与单独细胞差异不显著OP＜0.05)；但PPARr2、MyoG mRNA在第5天表达丰度较单独细胞低，且差异显著（P＜0.05），第10天表达量有所提高。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 文献综述
• 第一章 脂肪与肌肉组织间的相互作用关系
• 1.1 脂肪组织
• 1.1.1 脂肪形成及其细胞与分子事件
• 1.1.1.1 前体脂肪细胞的分化过程
• 1.1.1.2 脂肪细胞分化过程中的基因表达
• 1.1.1.3 激素对脂肪细胞分化的调控作用
• 1.1.1.4 细胞因子超家族成员
• 1.1.2 脂肪沉积的不同部位对脂代谢的影响
• 1.2 肌肉组织
• 1.2.1 肌分化的基本过程
• 1.2.2 成肌表型分化
• 1.2.3 肌分化过程中的细胞调亡
• 1.2.4 几种重要的肌决定因子（MDFs）
• 1.2.4.1 成肌特异的bHLH转录因子
• 1.2.4.2 其他重要的成肌特异因子
• 1.3 能量及底物利用与脂肪-骨骼肌相互作用
• 1.3.1 脂肪组织能量储存和释放功能
• 1.3.2 脂肪沉积部位影响脂肪与肌肉间的相互作用
• 1.3.3 肌肉组织的能量利用
• 1.3.4 能源底物的来源
• 1.3.5 脂肪酸的吸收
• 1.3.6 肌肉组织中葡萄糖的转运
• 1.3.7 骨骼肌中的能量分配
• 1.3.8 运动与底物利用
• 1.3.9 研究自/旁分泌效应的特殊方式
• 1.4 细胞因子与脂肪-骨骼肌轴的调节
• 1.4.1 瘦素
• 1.4.2 肿瘤坏死因子-α
• 1.4.3 IL-15
• 1.4.4 PAI-1
• 1.4.5 脂质素
• 1.4.6 ASP
• 1.4.7 抵抗素
• 1.4.8 脂联素
• 1.4.9 IL-6与IGF-1
• 第二章 脂肪细胞与骨骼肌细胞体外联合培养的研究进展
• 2.1 脂肪细胞与骨骼肌细胞共培养的方法学研究
• 2.1.1 脂肪细胞与骨骼肌细胞的间接共培养
• 2.1.2 脂肪细胞与骨骼肌细胞的直接共培养
• 2.2 脂肪细胞与骨骼肌细胞共培养的体系研究
• 2.3 脂肪细胞与骨骼肌细胞联合培养生长特性的研究
• 实验研究
• 前言
• 第三章 猪前体脂肪细胞与骨骼肌肌卫星细胞联合培养体系的建立
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.3 统计学分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 脂肪细胞与肌细胞的鉴定
• 3.2.2 接种浓度比对共培养细胞增殖率的影响
• 3.2.3 培养时间对共培养细胞贴壁率的影响
• 3.2.4 培养基类型对共培养细胞存活率的影响
• 3.2.5 血清浓度对共培养细胞存活率的影响
• 3.3 讨论
• 第四章 猪前体脂肪细胞与肌卫星细胞联合培养增殖与分化特性的研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.3 统计学分析
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 脂肪细胞与肌细胞的鉴定
• 4.2.2 细胞形态学观察
• 4.2.3 联合与单独培养细胞的生长曲线
• 4.2.4 联合与单独培养细胞特异性基因的表达分析
• 4.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 缩略词
• 致谢
• 作者简介