真菌壁寡糖及外分泌蛋白的分离提取和诱抗活性机理的初步研究

论文摘要

寡糖类生物农药的研发,是植物病害生物防治领域的重要课题。来源于真菌的寡聚糖,在调节植物生长发育及诱导植物抗病方面有着重要的作用。本文以DL1805菌为实验材料,对真菌细胞壁寡糖的制备条件、分离、纯化及其对植物的诱导活性等进行了系统研究。对影响DL1805菌生长的主要条件进行了筛选研究,结果表明:pH为6.8的豆种培养基最适合DL1805菌的生长,10%的接种量、180r/min转数的摇床培养、25℃培养60h,菌的生长量最大;发酵液中蛋白含量在4天时达到最大值。对热解所得的DL1805菌寡聚糖进行离子交换层析,通过SP-Sepharose分离后得到了三个明显的峰,即两个糖峰和一个蛋白峰,基本达到将寡聚糖与蛋白分离的目的。液相分析得知活性成分单糖组成-半乳糖:葡萄糖:甘露糖= 1:12:5。对DL1805菌来源的寡聚糖进行了生物活性分析。荧光显微镜观察得知:该菌糖能够诱导烟草表皮细胞产生NO和H2O2,对抑制蚕豆气孔开放也有一定效果;该菌糖可抑制烟草花叶病毒的侵染;菌糖诱导对大豆幼苗生长发育有较明显的促进效果。DL1805菌发酵液及由发酵液中分离的外分泌蛋白在诱导植保素的产生和抗烟草花叶病毒病方面也有较好的活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1. 激发子及其诱抗机理
• 1.1 激发子类型
• 1.2 激发子的诱抗机理
• 2. 寡糖素的研究进展
• 2.1 由真菌细胞壁多糖得到的寡聚糖
• 2.2 由植物细胞壁多糖得到的寡聚糖
• 2.3 其它寡糖类激发子
• 3. 本论文的研究目的、意义及研究内容
• 第2章 DL1805 真菌发酵工艺的研究
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 培养基和培养条件的筛选
• 1.2.2 硫酸-蒽铜法测定总糖的含量
• 1.2.3 考马斯亮蓝测定蛋白含量
• 2. 实验结果与分析
• 2.1 培养基和培养条件的筛选
• 2.1.1 静置条件下培养基对 DL1805 菌生长的影响
• 2.1.2 摇床培养对 DL1805 菌生长的影响
• 2.1.3 培养基pH 值对菌生长的影响
• 2.1.4 温度对菌生长的影响
• 2.1.5 摇床转速对菌生长的影响
• 2.1.6 接种量对 DL1805 菌生长的影响
• 2.2 发酵液总糖量的变化
• 2.3 发酵液总蛋白含量的变化
• 3. 小结
• 第3章 寡聚糖的分离提取
• 1. 寡聚糖的提取
• 1.1 实验材料与方法
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 实验方法
• 1.2 实验结果与分析
• 1.2.1 真菌细胞壁破碎方法
• 1.2.2 粗糖提取方法比较
• 1.2.3 诱导大豆产生植保素活性测定
• 1.3 小结
• 2. 寡聚糖的分离及单糖测定
• 2.1 实验材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 实验结果与分析
• 2.2.1 寡聚糖的离子交换层析分析
• 2.2.2 诱导大豆产生植保素活性测定
• 2.2.3 活性组分的质谱分析
• 2.2.4 寡聚糖的高效液相色谱分析
• 2.3 小结
• 第4章 寡糖生物活性测定
• 1. 寡糖激发子诱导烟草抗性反应
• 2O₂和 NO'>1.1 寡糖诱导烟草表皮细胞产生 H₂O₂和 NO
• 1.1.1 实验材料与方法
• 1.1.1.1 实验材料
• 1.1.1.2 实验方法
• 1.1.2 实验结果与分析
• 20₂'>1.1.2.1 寡糖诱导烟草表皮细胞产生 H₂0₂
• 1.1.2.2 寡糖诱导烟草表皮细胞产生 NO
• 1.2 寡糖诱导烟草抗烟草花叶病毒活性测定
• 1.2.1 实验材料与方法
• 1.2.1.1 实验材料
• 1.2.1.2 实验方法
• 1.2.2 实验结果与分析
• 2. 寡糖诱导蚕豆气孔开闭
• 2.1 实验材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 实验结果与分析
• 2.2.1 寡糖处理不同时间对蚕豆气孔开闭的影响
• 2.2.2 不同浓度寡糖对蚕豆气孔开闭的影响
• 3. 寡糖诱导对大豆幼苗生长发育的影响
• 3.1 实验材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 实验结果与讨论
• 3.2.1 寡糖诱导对大豆幼苗茎粗的影响
• 3.2.2 寡糖诱导对大豆幼苗株高的影响
• 3.2.3 寡糖诱导对大豆幼苗生长量的影响
• 3.3 小结
• 第5章 DL1805 菌发酵液及外分泌蛋白的初步研究
• 1. 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 供试菌外分泌蛋白的分级沉淀
• 1.2.2 考马斯亮蓝法测定蛋白含量
• 1.2.3 大豆子叶法测定外分泌蛋白生物活性
• 1.2.4 诱导烟草抗烟草花叶病毒活性测定
• 2. 实验结果与分析
• 2.1 发酵液诱导烟草抗 TMV
• 2.2 菌体外分泌蛋白活性测定
• 2.2.1 菌体外分泌蛋白诱导烟草抗 TMV
• 2.2.2 菌体外分泌蛋白诱导大豆植保素产生
• 3. 小结
• 第6章 结论与展望
• 参考文献
• 致谢
• 发表文章