犬心房不同部位缝隙连接蛋白40、43、45的分布研究

论文摘要

实验目的房性心律失常在临床上十分常见，严重危害人类健康。房性心律失常最常见的是由折返机制引起。电传导的不均匀性是引起心律失常的重要因素。射频消融术的开展提供了房性心律失常最有效的治疗手段，同时也表明了房性心律失常不仅是功能性的，而且有解剖学基础。但迄今为止，房性心律失常的形态学基础仍存在较大的争议性。心律失常不仅在宏观形态学上有其结构基础，在微观蛋白的表达不同也是心律失常的结构基础。正常心脏的心电活动与节律性收缩，有赖于心肌细胞之间信息通道传递的完整性。细胞连接通讯是动物体内细胞通讯的重要方式之一，其发挥细胞之间信息传递功能的结构基础是细胞间隙连接，细胞间隙连接的重要结构成份是连接蛋白。连接蛋白在维持心肌细胞的连接通讯功能、电信号传导和正常的节律性的收缩中起重要作用。近年来有关于心房缝隙连接的研究表明：同一部位缝隙连接的数量改变或功能下降会使动作电位传导速度减慢，从而使折返易于发生，导致心律失常。但关于心房不同部位缝隙连接蛋白（connexin，Cx）分布是否有差别的研究很少。本研究通过观察犬心房不同部位缝隙连接蛋白的分布特点，进一步探讨心房肌细胞在心律失常中的作用。材料与方法一．免疫荧光组织化学染色取成年杂种犬10条，腹腔麻醉。将心脏整体取下。取右心耳、卵圆窝以上右心房内光滑部、冠状静脉窦口三块组织，常规冰冻切片。在加苦味酸的甲醛溶液（2％甲醛+0.2％苦味酸）中固定45分钟。用PBS（0.01mmol／L，pH7.5）漂洗3次每次5min。1：80稀释的抗Cx40、43、45多克隆抗体（SANTACRUZ，USA）4℃孵育过夜4℃。次日经PBS（0.01mmol／L，pH7.5），震荡清洗3次每次5min，滴加1：100稀释的异硫氰酸荧光黄（FITC）标记的牛抗羊IgG二抗室温孵育0.75h，再经PBS震荡漂洗3次每次5min，用60％缓冲甘油封片。全过程需要避光操作。二．激光共聚焦显微镜技术激光共聚焦显微镜观察，每一张切片取4～6个视野，将数字化图像储存于计算机。图象分析方法：应用Image Analysis程序进行图像分析，测定Cx40、Cx43和Cx45像素密度，同时测定Cx40、Cx43和Cx45荧光斑面积的大小，以的像素密度和荧光斑面积大小代表Cx40、Cx43和Cx45量的多少，对其进行定量分析。实验结果激光共聚焦显微镜观察及图像分析结果为：右心房光滑部、CSO心肌Cx43像素密度分别较右心耳组减少了22.2％、40．0％，P均＜0.01。右心房光滑部、CSO心肌Cx40像素密度分别较右心耳组减少了29.9％、37.1％，P均＜0.01。右心耳、右心房光滑部、CSO未发现有Cx45表达。结论1、心房肌中Cx40、43表达较丰富，未见心房肌中Cx45表达。2、心房各个部位Cx40、43表达不同。3、Cx40、43在右心耳的分布＞右心房光滑部＞CSO，分布有显著性差别。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 在学期间科研成绩
• 致谢
• 个人简历