四种真菌毒素检测方法的建立以及赭曲霉毒素A脱除方法的初步研究

论文摘要

真菌毒素,是某些真菌产生的代谢产物或二级代谢产物,通常存在于霉变的谷物中,一旦通过食物链进入人体后,将可能造成致畸,致突变和致癌等严重危害,因此在全球食品安全中备受关注。目前,真菌毒素的检测方法较多,其中高效液相色谱法精密度最高。本论文按照真菌毒素研究学者普遍认同的菌属产毒的分类方法,针对不同菌属产生的真菌毒素具有分子结构式相似的特点,选出具有代表性的四种真菌毒素,同时针对不同的食品,系统的建立了这四种真菌毒素的免疫亲和层析高效液相色谱的检测方法,方法操作简便、准确,回收率高、精密度良好、重现性好,最终并且初步研究了赭曲霉毒素A的微生物脱毒方法。赭曲霉毒素A的免疫亲和层析高效液相色谱的检测方法的建立。经甲醇-水或碳酸氢钠-水溶液提取,提取液稀释过滤后经过含有赭曲霉毒A特异性抗体的免疫亲和柱层析净化,洗脱液用C18色谱柱分离,荧光检测器测定。流动相为乙腈:水:乙酸为99:99:2;激发波长333nm;发射波长477nm;柱温35℃;进样量100μl;外标法定量,结果表明,色谱峰面积与含量之间有良好的线性关系,方法的检出限为0.2μg/kg,加标回收率为90.3%～106%,对不同浓度的样品相对标准偏差RSD为1.75%～4.32%。T-2毒素的免疫亲和层析高效液相色谱的检测方法的建立。经甲醇-水溶液提取,提取液稀释过滤后经过含有T-2毒素特异性抗体的免疫亲和柱层析净化,洗脱液用C18色谱柱分离,用1-蒽腈（1-AN）来将其衍生,荧光检测器测定。流动相为乙腈:水=75:25;激发波长381nm;发射波长470nm;柱温35℃;进样量20μl;外标法定量,结果表明,色谱峰面积与含量之间有良好的线性关系,方法的检出限为5μg/kg,加标回收率为82.6%～103.2%,对不同浓度的样品相对标准偏差RSD为1.9%～5.6%。玉米赤霉烯酮的免疫亲和层析高效液相色谱的检测方法的建立。试样经乙腈-水溶液提取,提取液稀释过滤后经过含有玉米赤霉烯酮特异性抗体的免疫亲和柱层析净化,洗脱液用C18色谱柱分离,荧光检测器测定。流动相为乙腈:水:甲醇为46:46:8;激发波长274nm;发射波长440nm;柱温35℃;进样量100μl;外标法定量,结果表明,色谱峰面积与含量之间有良好的线性关系,方法的检出限为0.1μg/kg,加标回收率为69.3%～101.3%,对不同浓度的样品相对标准偏差RSD为5.0%～11.6%。呕吐毒素的免疫亲和层析高效液相色谱的检测方法的建立。试样经聚乙二醇水溶液提取,提取液稀释过滤后经过含有呕吐毒素特异性抗体的免疫亲和柱层析净化,洗脱液用C18色谱柱分离,荧光检测器测定。流动相为甲醇:水为20:80;检测波长218nm;柱温35℃;进样量50μl;外标法定量,结果表明,色谱峰面积与含量之间有良好的线性关系,方法的检出限为0.1mg/kg,加标回收率为65.8%～85.9%,对不同浓度的样品相对标准偏差RSD为3.1%～6.8%。此外本实验发现,红发夫酵母对赭曲霉毒素A的脱除效果最为理想,可以将赭曲霉毒素A转化为赭曲霉毒素a,另外对红发夫酵母对赭曲霉毒素A的脱毒条件进行了优化,发现红发夫酵母在30摄氏度可以保持较高活性,脱毒13天,温度在25—35摄氏度时红发夫酵母对赭曲霉毒素A的降解率最高,可以达到80%以上。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 真菌毒素的危害及污染点
• 2 真菌毒素检测方法的研究进展
• 2.1 薄层色谱（TLC）
• 2.2 高效液相色谱法（HPLC）
• 2.3 气相色谱（GC）
• 2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 2.5 超临界流体色谱法和毛细管电动色谱配激发光子束荧光检测
• 3 免疫亲和柱的应用现状及发展前景
• 4 真菌毒素脱除方法的研究进展
• 4.1 物理方法
• 4.2 化学方法
• 4.3 生物降解法
• 5 本论文研究目的和意义
• 6 本论文技术路线
• 第一章 赭曲霉毒素A检测方法的确立
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂和材料
• 1.2 仪器和设备
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 实验原理
• 1.3.2 试样的制备与提取
• 1.3.3 净化
• 1.3.4 洗脱
• 1.3.5 高效液相色谱条件
• 2 结果与讨论
• 2.1 提取液的选择
• 2.2 净化条件的选择
• 2.3 洗脱液的选择
• 2.4 色谱条件的选择
• 2.4.1 测定波长的确定
• 2.4.2 流动相的选择
• 2.4.3 色谱条件
• 2.5 线性范围
• 2.6 加标回收率和精密度试验
• 2.7 检出限（LOD）及测定低限（LOQ）
• 3 本章小结
• 第二章 T-2毒素检测方法的确立
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂和材料
• 1.2 仪器和设备
• 1.3 实验步骤
• 1.3.1 实验原理
• 1.3.2 试样的制备与提取
• 1.3.3 净化
• 1.3.4 洗脱
• 1.3.5 衍生
• 1.3.6 高效液相色谱条件
• 2 结果与讨论
• 2.1 提取液的选择
• 2.2 净化条件的选择
• 2.3 洗脱液的选择
• 2.4 衍生化条件的优化
• 2.5 色谱条件的选择
• 2.5.1 测定波长的确定
• 2.5.2 流动相的选择
• 2.5.3 色谱条件
• 2.5.4 分析结果的计算
• 2.6 线性范围
• 2.7 加标回收率和精密度试验
• 2.8 检出限（LOD）及测定低限（LOQ）
• 3 本章小结
• 第三章 玉米赤霉烯酮检测方法的确立
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂和材料
• 1.2 仪器和设备
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 实验原理
• 1.3.2 试样的制备与提取
• 1.3.3 净化
• 1.3.4 洗脱
• 1.3.5 高效液相色谱条件
• 2 结果与讨论
• 2.1 提取液的选择
• 2.2 净化条件的选择和优化
• 2.3 洗脱液的选择
• 2.4 色谱条件的选择
• 2.4.1 测定波长的确定
• 2.4.2 流动相的选择
• 2.4.3 色谱条件
• 2.5 线性范围
• 2.6 加标回收率和精密度试验
• 2.7 检出限（LOD）及测定低限（LOQ）
• 2.8 检出限（LOD）及测定低限（LOQ）
• 3 本章小结
• 第四章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂和材料
• 1.2 仪器和设备
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 实验原理
• 1.3.2 试样的制备与提取
• 1.3.3 净化
• 1.3.4 洗脱
• 1.3.5 高效液相色谱条件
• 2 结果与讨论
• 2.1 提取液的选择
• 2.2 净化条件的选择
• 2.3 洗脱液的选择
• 2.4 免疫亲和柱的吸附容量
• 2.5 色谱条件的选择
• 2.5.1 测定波长的确定
• 2.5.2 色谱柱的选择
• 2.5.3 流动相的选择
• 2.5.4 柱温的确定
• 2.5.5 色谱条件
• 2.6 线性范围
• 2.7 加标回收率和精密度试验
• 2.8 检出限（LOD）及测定低限（LOQ）
• 3 本章小结
• 第五章 赭曲霉毒素A的酵母脱除方法的研究
• 1 材料和方法
• 1.1 实验仪器及药品
• 1.2 HPLC实验条件
• 1.3 红发夫酵母对OTA脱除实验
• 1.3.1 培养时间对OTA降解的影响
• 1.3.2 温度对OTA降解的影响
• 1.3.3 温度对菌株的影响
• 2 实验结果和讨论
• 2.1 红发夫酵母对OTA的脱除作用
• 2.2 红发夫酵母对OTA脱除实验
• 2.2.1 培养时间对OTA降解的影响
• 2.2.2 温度对OTA降解的影响
• 2.2.3 温度对菌株的影响
• 3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
• 致谢