骨关节炎中Wnt/β-catenin信号通路调控骨桥蛋白表达的初步研究

论文摘要

目的：明确骨关节炎中骨桥蛋白的表达是否受到Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin/TCF-4复合体调控,并探讨其相关调控机理,为寻找防治OA的安全有效的靶点提供理论依据。方法：体外培养人OA软骨细胞和正常关节软骨细胞,1.Real Time-PCR检测β-catenin和OPN在第一代OA和正常软骨细胞中的mRNA表达水平；2、取第二代OA软骨细胞,分为实验组和空白对照组,Wnt/β-catenin信号通路负性调节因子DKK-1下调实验组β-catenin表达后,Real Time-PCR和Western Blot检测OPN mRNA和蛋白表达水平；3、取第二代OA软骨细胞,分为TCF-4 siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,利用siRNA抑制TCF-4表达后,Real Time-PCR和Western Blot检测TCF-4和OPN mRNA和蛋白表达水平。结果：1、OA软骨细胞β-catenin和OPN mRNA表达均高于正常软骨细胞（p<0.01）；2、DKK-1下调β-catenin表达后,OA软骨细胞OPN mRNA和蛋白表达均降低（p<0.01）；3.siRNA干扰TCF-4后,OA软骨细胞TCF-4和OPN mRNA与蛋白表达均降低（p<0.05）结论:1.DKK-1可抑制OA软骨细胞OPN表达；2.TCF-4 siRNA可抑制OA软骨细胞OPN表达；3.Wnt/β-catenin信号通路通过TCF-4/β-catenin复合体可调控OA软骨细胞OPN表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 人软骨细胞体外培养及鉴定
• 2.2.2 检测OA及正常软骨细胞β-catenin和OPN表达
• 2.2.3 DKK-1下调OA软骨细胞β-catenin表达后检测OPN表达
• 2.2.4 siRNA抑制TCF-4后检测OA软骨细胞TCF-4和OPN表达
• 2.2.5 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 原代人软骨细胞培养
• 3.2 Real Time-PCR检测β-catenin和OPN在OA组及正常组的表达
• 3.3 DKK-1下调OA软骨细胞β-catenin表达后OPN mRNA和蛋白表达
• 3.4 siRNA抑制OA软骨细胞TCF-4表达后OPN mRNA和蛋白表达
• 第四章 讨论
• 4.1 人OA软骨细胞体外培养方法及鉴定
• 4.2 Wnt/β-catenin信号通路在OA发生、发展中的作用
• 4.3 OPN在OA组织中表达的意义
• 4.4 β-catenin/TCF-4复合体在OA中对OPN的调控及其机理
• 第五章 结论
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间主要的研究成就