论文摘要
目的:糖尿病肾病（diabetic nephropathy, DN）是糖尿病微血管并发症之一,晚期表现为糖尿病性肾小球硬化,是糖尿病致死、致残的主要原因之一。其发病机制复杂,目前尚无特效疗法,因此寻找治疗DN的有效方法具有重大意义。本研究通过链脲佐菌素（streptozotosin, STZ）腹腔注射法建立DN大鼠模型,应用益气养阴消癥通络中药复方对其进行干预,通过观察实验动物24小时尿蛋白定量、肾功能（Scr, BUN）、糖化血红蛋白、肾脏病理形态学变化以及肾皮质肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α） mRNA水平,来明确该中药复方对DN的治疗作用,并探讨其可能的发病机制,为该处方的临床应用提供实验基础和理论依据。方法:健康雄性Sprague-Dauley大鼠85只,体重230g±20g,适应性饲养一周,测定尿糖和尿蛋白均为阴性后,经背部切口行左肾切除术。2周后随机选取10只作为正常组,其余大鼠给予一次性腹腔注射STZ40mg/kg,正常组大鼠给予一次性腹腔注射等体积的0.1mol/L枸橼酸缓冲液,72小时后测血糖,三次连续随机尾静脉血糖≥16.7mmol/L为糖尿病造模成功。将成模大鼠随机分为5组:模型组、益气养阴消癥通络中药低剂量组（简称低剂组）、益气养阴消癥通络中药中剂量组（简称中剂组）、益气养阴消癥通络中药高剂量组（简称高剂组）、厄贝沙坦组,每组15只。成模一周后,开始给药,每日一次,中药低、中、高剂量组分别给予中药5.29g/kg/d、10.58g/kg/d、21.16g/kg/d灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦15mg/kg/d灌胃,正常组与模型组均灌服相应量生理盐水,共给药12周。动物均以普通饲料喂养,自由进食、饮水,室温18-20℃,相对湿度40%-70%,12小时交替照明。实验期间注意监测血糖,对血糖≥26mmol/L的大鼠,皮下注射适量长效胰岛素（0.5-4u）以避免酮症,减少死亡。于给药第12周末,禁食12小时,不禁水,留取各组大鼠24小时尿液,测定24小时尿蛋白定量,3%戊巴比妥钠麻醉动物并称量体重,股动脉取血,摘取右侧肾脏并称重,计算肥大指数,留取肾脏标本,光镜、电镜下观察肾脏病理形态学变化,提取各组肾皮质RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测TNF-αmRNA水平。结果:1各组大鼠体重、右肾重、肥大指数（肾重/体重）与正常组相比,模型组和各治疗组的体重明显减轻（P<0.05）,模型组与各治疗组相比,体重无明显的差异（P>0.05）,各治疗组之间体重无明显的差异（P>0.05）;右肾重各组间均没有明显的差异（P>0.05）;与正常组相比,模型组及各治疗组的肥大指数明显升高（P<0.05）,模型组与各治疗组以及各治疗组之间无显著的差异（P>0.05）。2各组大鼠24小时尿蛋白定量与正常组相比,模型组及各治疗组24小时尿蛋白定量均明显升高（P<0.05）;与模型组相比,中药各剂量组和厄贝沙坦组24小时尿蛋白定量均明显下降（P<0.05）;中药各剂量组以及厄贝沙坦组之间无显著差异（P>0.05）。3各组大鼠糖化血红蛋白的比较与正常组相比,模型组及各治疗组糖化血红蛋白均明显增高（P<0.05）;模型组和各治疗组以及各治疗组之间无显著性差异（P>0.05）。4各组大鼠肾功能的比较与正常组相比,模型组及各治疗组大鼠血清肌酐水平均明显增高（P<0.05）;与模型组相比,各治疗组大鼠血清肌酐水平明显降低（P<0.05）;各治疗组之间血清肌酐水平无显著差异（P>0.05）。与正常组相比,模型组及各治疗组大鼠尿素氮水平均明显增高（P<0.05）;与模型组相比,各治疗组大鼠尿素氮水平明显降低（P<0.05）;各治疗组之间尿素氮水平无显著差异（P>0.05）。5肾脏病理观察5.1光镜观察正常组大鼠肾脏肾小球结构完整,未见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜、系膜细胞数量及系膜基质无明显改变;模型组大鼠肾脏肾小球肥大明显,肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜区增宽;各治疗组均有不同程度的病理改变,但与模型组相比较轻,为肾小球轻度的肥大,少量的系膜细胞和基质的增多,各组间无明显区别。5.2电镜观察正常组显示肾小球基底膜的结构完整,毛细血管内皮细胞和足细胞无异常;模型组显示肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜基质的增多,且有足细胞足突融合;各治疗组也都有不同程度病理改变,但较模型组轻,为肾小球毛细血管基底膜轻度的增厚,系膜基质轻度的增生,且伴有部分足突融合,但各组间无明显区别。6肾皮质TNF-αmRNA水平的比较与正常组相比,模型组及各治疗组肾皮质TNF-αmRNA水平均明显增高（P<0.05）;与模型组相比,各治疗组肾皮质TNF-αmRNA的水平均明显降低（P<0.05）;各治疗组间无明显差异（P>0.05）。结论:1益气养阴消癥通络中药可以减轻糖尿病肾病大鼠的肾脏病理损害,降低24小时尿蛋白定量,降低肌酐、尿素氮水平,保护肾功能。2益气养阴消癥通络中药可以通过抑制肾皮质中TNF-αmRNA的表达,发挥对DN的治疗作用,此可能为该方防治糖尿病肾病发生发展的作用机制之一。
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