祛瘀解毒法对血瘀蕴毒型子宫内膜异位症卵泡液及颗粒细胞TNF-α、IL-6的研究

论文摘要

目的:观察祛瘀解毒颗粒结合辅助生殖技术（ART）治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症不孕的疗效并探讨其作用机理,试图开辟中医药治疗EM不孕的新思路,为临床有效治疗该病提供依据。方法:临床研究:60例子宫内膜异位症（EM）不孕患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。治疗组有20例口服祛瘀解毒颗粒结合氯米芬（CC）促排卵+宫腔内人工授精（IUI）;另外10例口服祛瘀解毒颗粒同时行IVF-ET。对照组有20例单纯给CC促排卵+IUI,另外10例行IVF-ET。观察治疗前后血瘀蕴毒证候积分变化、妊娠率、免疫及内分泌学相关指标、血清和卵泡液TNF-α、IL-6含量以及卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达情况。实验研究一:40例EM模型大鼠随机分为试验组、观察组各20例,另取20只大鼠只牵拉子宫作为空白组。试验组每天给予祛瘀解毒颗粒溶于2ml生理盐水灌胃,观察组和空白组均给予2ml生理盐水,连续灌胃3周。末次给药后24h各组大鼠均给予人绝经后促性腺激素（HMG）50IU腹腔注射,48h后给予人绒毛膜促性腺激素（HCG）100IU/100g,1416h后处死大鼠收集卵细胞及颗粒细胞团,观察优质卵细胞数目及优质卵细胞率,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达。实验研究二:配制不同的培养液,对20只小鼠超排卵共收集189枚2-细胞鼠胚分别放入各组培养液进行培养。其中治疗组培养液为P-1胚胎培养液加10%SSS加10%治疗组EM患者卵泡液;对照组为培养液P-1胚胎培养液加10%SSS加10%对照组EM患者卵泡液;空白组培养液为P-1胚胎培养液加10%SSS加10%空白组人卵泡液。每日在显微镜下观察小鼠胚胎情况。结果:1.祛瘀解毒颗粒能够有效改善患者血瘀蕴毒证候,提高妊娠率,降低EMAb的阳性率及CA125水平,改善内分泌状态,降低患者血清及卵泡液TNF-α、IL-6的含量,降低卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达,效果明显优于对照组（P<0.05）。2.试验组大鼠优质卵细胞数目、优质卵细胞率明显高于观察组（P<0.05）,颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达明显低于观察组（P<0.05）。3.小鼠2-细胞胚胎在治疗组及空白组培养液中发育到8-细胞期、桑葚胚及囊胚及优质胚胎的比率均明显高于对照组（P<0.05）。结论:祛瘀解毒颗粒可以改善血瘀蕴毒症候,提高EM不孕患者妊娠率,是治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症的有效药物。推测其作用机理可能与调节免疫功能,改善内分泌状态,降低卵泡液TNF-α、IL-6水平及颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达等有关,通过旁分泌或（和）自分泌方式直接或间接参与卵巢功能的局部调节,改善卵子生存的内环境,提高卵细胞质量,减少对胚胎的毒性作用,从而提高EM患者妊娠率。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 文献研究
• 一、现代医学对子宫内膜异位症不孕的研究进展
• （一） 现代医学对子宫内膜异位症致不孕病因认识
• （二） 现代医学对子宫内膜异位症致不孕治疗认识
• 二、中医学对子宫内膜异位症不孕的研究进展
• （一） 中医对子宫内膜异位症病因病机认识
• （二） 中医对子宫内膜异位症不孕治疗认识
• 临床研究
• 技术路线图
• 一、研究对象
• （一） 病例来源
• （二） 诊断标准
• （三） 病例选择标准
• （四） 症状分级量化评分标准
• （五） 观察项目
• 二、研究方法
• （一） 临床分组
• （二） 药物、实验室设备及培养液
• （三） 用药方法
• （四） 标本的收集
• （五） 颗粒细胞TNF-Α、IL-6MRNA 表达量的定量测定
• （六） 统计学分析
• 三、一般资料
• （一） 治疗组、对照组及空白组患者年龄（岁）分布比较（见表3）
• （二） 治疗组与对照组患者病程（年）比较（见表4）
• （三） 治疗组与对照组孕产史分布比较（见表5）
• （四） 治疗组与对照组患者治疗前血瘀蕴毒证候积分比较（见表6）
• （五） 治疗组与对照组治疗前基础内分泌的比较（见表7）
• 四、研究结果
• （一） 治疗组与对照组患者治疗前后血瘀蕴毒证候积分变化比较（见表8）
• （二） 治疗组与对照组妊娠率的比较（见表9）
• （三） 治疗组与对照组氯米芬结合IUI 妊娠率的比较（见表10）
• （四） 治疗组、对照组及空白组IVF 控制超促排卵结果（见表11）
• （五） 治疗组与对照组治疗前后黄体期内分泌指标比较（表12）
• （六） 治疗组与对照组治疗前后外周血EMAB 效价比较（表13）
• （七） 治疗组与对照组治疗前后血清CA125、TNF-Α、IL-6 含量的比较（表14）
• （八） 治疗组、对照组及空白组卵泡液TNF-Α、IL-6 的比较（表15）
• （九） 治疗组、对照组及空白组颗粒细胞TNF-ΑMRNA、IL-6MRNA 表达的比较（表 16）
• 五、讨论
• （一） 血瘀蕴毒病机的建立与子宫内膜异位症的关系
• （二） 祛瘀解毒颗粒组成与应用基础
• （三） 研究结果分析
• 实验研究
• 技术路线图
• 实验一 祛瘀解毒颗粒对子宫内膜异位症模型大鼠卵巢颗粒细胞TNF-ΑMRNA、 IL-6MRNA 表达的影响
• 一、材料与方法
• （一） 药物与试剂
• （二） 实验仪器与设备
• （三） 引物设计与合成
• （四） 实验动物
• （五） 实验方法
• 二、实验结果
• （一） 祛瘀解毒颗粒对EM 大鼠优质卵数以及优质卵率的影响（见表18）
• （二） 祛瘀解毒颗粒对EM 大鼠颗粒细胞TNF-ΑMRNA 表达的影响（见表19）
• （三） 祛瘀解毒颗粒对EM 大鼠颗粒细胞IL-6MRNA 表达的影响（见表20）
• 三、讨论
• （一） EM 模型大鼠优质卵细胞数目和优质卵细胞率分析
• （二） EM 模型大鼠卵巢颗粒细胞TNF-Α、IL-6 分析
• 实验二 子宫内膜异位症患者卵泡液对小鼠胚胎发育影响的研究
• 一、材料与方法
• （一） 实验动物
• （二） 药物与试剂
• （三） 实验仪器与设备
• （四） 实验方法
• （五） 统计学分析
• 二、实验结果
• （一） 早期鼠胚在三种培养液中发育情况比较（见表21）
• （二） 早期鼠胚优质胚胎数目及优质胚胎率的比较（见表22）
• 三、讨论
• （一） EM 患者卵泡液对早期鼠胚体外培养的影响
• （二） 祛瘀解毒颗粒治疗后EM 患者卵泡液对早期鼠胚体外培养的影响
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 查新报告