红松多酚分离鉴定及对辐射诱导氧化伤害的防护作用

论文摘要

红松（Pinus koraiensis Sieb.et Zucc）,主要是产于黑龙江省中北部小兴安岭的珍贵树种。红松中含有大量的酚类化合物,包括萜类、多酚类、生物碱等多种生物活性成分,具有抗辐射、抗氧化等多种生物学功能。本研究以小兴安岭的红松为实验原料,系统地研究了红松中的多酚组成和有效成分的抗氧化及抗辐射生物活性。采用乙醇作为红松多酚的萃取溶剂,并且研究了红松中的有效成分的提取工艺,优化了最佳提取工艺条件。用大孔树脂AB-8纯化红松多酚,利用不同梯度乙醇洗脱出来的红松多酚从清除自由基、铁离子螯合能力以及总还原能力等体外抗氧化指标研究了红松提取物的抗氧化活性。本实验采用生物活性跟踪方法,通过体外抗氧化性筛选出生物活性较强组分进行人体外周血白细胞和动物抗辐射实验,并且利用半制备液相色谱技术二级纯化红松多酚,最后用高效液相色谱鉴定红松提取物中的多酚组分。本研究的主要内容如下:（1）红松多酚萃取溶剂的筛选,选取了甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和水五种溶剂萃取红松多酚,其中乙醇提取物得率高达到7.78mg/g,确定乙醇作为萃取溶剂。（2）采用超声波法提取红松中的多酚成分,通过单因素试验确定影响多酚得率的因素及条件,在单因素试验的基础上,结合响应面方法优化提取工艺,在固定超声功率160W前提下,得到最佳提取工艺条件为超声时间30.61min、料液比1: 30.79和乙醇浓度42.20%。响应面模型在此条件下红松多酚提取率为8.241mg/g。（3）本实验采用生物活性跟踪方法,用AB-8大孔树脂一级纯化红松多酚,乙醇作为洗脱剂,得到20%,40%,60%不同浓度的乙醇洗脱物,冷冻干燥成红松多酚粉末。通过体外的生物活性指标包括羟基自由基（·OH）、超氧阴离子(O2-·)、ABTS自由基和DPPH自由基,铁离子螯合能力以及总还原能力考察生物活性比较强的组分,结果40%的乙醇洗脱物的生物活性要明显高于其它组分。（4）用半制备液相色谱技术二级纯化40%的乙醇洗脱物,得到高纯度的红松多酚,然后用高效液相色谱对其多酚组分进行分析,结果多酚含量最多的是香豆酸（321.4±1.0mg/100g）、水杨酸（117.7±3.1mg/100g）和香草酸（101.3±2.8mg/100g）,其次是咖啡酸（54.2±3.2mg/100g）和儿茶素（25.3±1.9mg/100g）,含量最少的成分是黄芩苷（8.05±1.2mg/100g）。（5）当人体外周血白细胞受到电离辐射之后,不同剂量组的红松多酚对白细胞数量的影响明显要高于辐射对照组,出现异型分叶、异型淋巴细胞和退行性变细胞。灌胃给予红松多酚可以抑制辐射对小鼠免疫器官胸腺和肝脏的损伤,能够显著地提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活力,并且能够降低过氧化产物丙二醛的含量。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 课题背景及研究目的和意义
• 1.2 松科植物多酚类物质的结构和理化性质
• 1.2.1 松科植物多酚的分子结构特征
• 1.2.2 松科植物多酚的理化性质
• 1.3 松科植物多酚的生物活性研究概况
• 1.3.1 抗氧化功能性研究
• 1.3.2 抗炎功能性研究
• 1.3.3 抗菌功能性研究
• 1.3.4 抗癌功能性研究
• 1.3.5 抗辐射功能性研究
• 1.3.6 松科植物多酚类化合物的其他利用价值
• 1.4 松树植物化学成分的国内外研究概况
• 1.5 课题主要研究内容
• 第2章 实验的材料与方法
• 2.1 实验试剂及材料
• 2.1.1 实验原料
• 2.1.2 实验试剂
• 2.2 实验仪器
• 2.3 测定方法
• 2.3.1 Folin-酚法测定多酚含量
• 2.3.2 免疫器官指数的测定方法
• 2.4 红松多酚的制备工艺优化
• 2.4.1 红松多酚的制备
• 2.4.2 红松多酚萃取溶剂的筛选
• 2.4.3 红松多酚提取工艺单因素实验条件的确定
• 2.4.4 红松多酚提取工艺的响应面优化
• 2.5 红松多酚的分离纯化及组分鉴定
• 2.5.1 AB-8 型大孔树脂一级分离纯化红松多酚
• 2.5.2 半制备液相色谱二级分离纯化红松多酚
• 2.5.3 红松多酚的高效液相色谱分析
• 2.6 红松多酚的体外抗氧化活性研究
• 2.6.1 红松多酚总还原能力测定
• 2.6.2 红松多酚清除羟自由基（OH·）能力测定
• 2-)能力的测定'>2.6.3 红松多酚清除超氧阴离子(O^2-)能力的测定
• 2.6.4 红松多酚清除ABTS 自由基能力测定
• 2.6.5 红松多酚清除DPPH 自由基能力测定
• 2.6.6 红松多酚对Fe2+离子螯合能力测定
• 2.7 红松多酚对人体外周血白细胞辐射防护作用
• 2.7.1 细胞培养皿的处理
• 2.7.2 人体外周血白细胞培养
• 2.7.3 红松多酚对人体外周血白细胞数量的影响
• 2.7.4 红松多酚对人体外周血白细胞形态结构的影响
• 2.8 红松多酚对辐射引起的氧化伤害防护作用
• 2.8.1 辐射模型的建立
• 2.8.2 样品采集及处理
• 2.8.3 检测指标与方法
• 第3章 红松多酚的制备工艺优化
• 3.1 FOLIN-酚法测定红松多酚含量的标准曲线
• 3.2 红松多酚萃取溶剂的筛选
• 3.3 红松多酚提取工艺单因素条件的确定
• 3.3.1 超声时间对提取红松多酚得率的影响
• 3.3.2 料液比对提取红松多酚得率的影响
• 3.3.3 乙醇浓度对提取红松多酚得率的影响
• 3.3.4 超声功率对红松多酚得率的影响
• 3.4 红松多酚提取工艺的响应面分析
• 3.4.1 响应面分析及实验结果
• 3.4.2 回归方程的建立与检验
• 3.4.3 提取因素之间的交互影响
• 3.4.4 红松多酚提取工艺验证试验
• 3.5 本章小结
• 第4章 红松多酚的分离纯化及组分鉴定
• 4.1 AB-8 型大孔树脂一级纯化红松多酚
• 4.2 半制备液相色谱二级纯化红松多酚
• 4.3 高效液相色谱分析红松多酚组分
• 4.3.1 多酚标准样品高效液相测定
• 5.3.2 红松多酚样品的高效液相测定
• 4.3.3 多酚混合标准样品测定
• 4.3.4 混合样品的标准曲线及其检测限的测定
• 4.3.5 红松样品中多酚物质的定量分析
• 4.4 本章小结
• 第5章 红松多酚的体外抗氧化活性研究
• 5.1 红松多酚清除羟自由基（OH·）能力测定
• 2-)能力的测定'>5.2 松多酚清除超氧阴离子(O^2-)能力的测定
• 5.3 松多酚清除ABTS 自由基能力测定
• 5.4 红松多酚清除DPPH 自由基能力测定
• 2+离子螯合能力测定'>5.5 松多酚对Fe²⁺离子螯合能力测定
• 5.6 松多酚总还原能力测定
• 5.7 本章小结
• 第6章 红松多酚对辐射诱导氧化伤害的
• 6.1 红松多酚在辐射条件下对人体外周血白细胞的影响
• 6.1.1 红松多酚对人体外周血白细胞数量变化的影响
• 6.1.2 红松多酚对人体外周血白细胞形态结构的影响
• 6.2 红松多酚对小鼠辐射防护的作用
• 6.2.1 辐射动物模型的建立
• 6.2.2 红松多酚对小鼠体重的影响
• 6.2.3 红松多酚对小鼠免疫指数的影响
• 6.2.4 红松多酚对超氧化物歧化酶（SOD）的影响
• 6.2.5 红松多酚对谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的影响
• 6.2.6 红松多酚对丙二醛（MDA）含量的影响
• 6.3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的学术论文
• 致谢