论文摘要
SCYL1-BP1是本实验室通过酵母双杂交技术,首先从人胎盘cDNA文库中克隆得到的一个能与SCYL1相互作用的新基因。前期的研究结果发现,该蛋白主要分布在核内,少量分布于核周和胞浆中。该基因转染细胞后能显著抑制肝癌细胞株的生长与集落形成,同时具有显著抑制荷瘤裸鼠的肿瘤形成的作用。该基因过表达时会延长细胞在G2-M期的停留时间,抑制细胞生长。该基因过表达能稳定P53蛋白免于被MDM2介导的泛素化途径降解。基因表达谱芯片检测发现当该基因被RNAi抑制时,可以引起NFκB的表达上调。相关文献报道表明,NFκB的过度激活可以引发肿瘤。结果提示,SCYL1-BP1基因具有细胞周期调控功能,并具有肿瘤抑制因子的特性。为了获得足够量的纯化SCYL1-BP1蛋白以便用于进行新药安全性检测和一系列药理学实验,我们拟采用基因工程技术将该蛋白大量表达。为此本论文分为两个部分,第一部分是关于SCYL1-BP1以大肠杆菌为宿主的原核工程菌株构建及后期蛋白鉴定纯化,第二部分是关于SCYL1-BP1在真核毕赤酵母中的克隆构建以及后期的蛋白分离鉴定。在论文的第一部分中,我们首先将SCYL1-BP1基因克隆到高效表达载体pET-28b-sumo上,构建了原核表达重组载体pET-28b-sumo-SCYL1BP1,后转入大肠杆菌表达宿主菌中,构建了原核表达系统。为了使得重组蛋白SCYL1-BP1大量表达,我们摸索了宿主菌种的选择、IPTG诱导浓度、诱导培养时间、接种量等条件的选择。以期获得重组蛋白的大量表达。但经过培养条件以及诱导条件的摸索,结果发现重组蛋白SCYL1-BP1在大肠杆菌这一原核表达系统中表达效果欠佳,并不能达到预期大量表达的效果。为此,我们进行了重组蛋白SCYL1-BP1的真核表达系统的构建。在论文的第二部分中,我们根据SCYL1-BP1蛋白的氨基酸序列,同时考虑到毕赤酵母的密码子偏爱性,设计引物,通过重叠PCR的方法,合成了适合在毕赤酵母中表达的全长SCYL1-BP1基因序列,并将其克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905A上,转化毕赤酵母GS115菌株,从而构建了重组蛋白SCYL1-BP1毕赤酵母真核表达系统。重组毕赤酵母菌株在BMGY中28℃,250rpm培养48h后,转接进入BMMY培养基中,进行26℃,250rpm培养,期间每隔24h向其中加入1%甲醇。培养。SDS-PAGE结果显示50-60kDa区间有特异性条带,初步表明外源蛋白在毕赤酵母中成功表达。
论文目录
相关论文文献
- [1].降解植物甾醇产9α-羟基雄烯二酮工程菌株构建及发酵工艺优化[J]. 食品工业科技 2020(14)
- [2].多媒体及启发式教育在工程菌株选育课的应用[J]. 现代交际 2013(12)
- [3].酿酒酵母产泛酸工程菌株的构建与诱变[J]. 发酵科技通讯 2017(03)
- [4].亚硫酸盐分泌量提高的啤酒酵母基因工程菌株发酵性能研究[J]. 酿酒科技 2008(07)
- [5].微生物源谷氨酰胺转氨酶基因工程菌株的研究进展[J]. 食品工业科技 2013(17)
- [6].β-甘露聚糖酶高产基因工程菌株发酵条件优化[J]. 湖南农业科学 2009(04)
- [7].具有高胱硫醚β-裂解酶活性的葡萄酒酵母工程菌株的构建[J]. 中国农业科学 2012(19)
- [8].麦角甾醇酵母基因工程菌株的发酵培养条件[J]. 吉林大学学报(医学版) 2010(04)
- [9].球孢白僵菌工程菌株构建及其环境安全性分析[J]. 镇江高专学报 2013(01)
- [10].大豆血红蛋白串联基因簇转化根瘤菌工程菌株的构建[J]. 黑龙江大学自然科学学报 2011(02)
- [11].反硝化基因工程菌株YP4S的构建及对污水除氮特性研究[J]. 基因组学与应用生物学 2019(02)
- [12].生防工程菌株BS-17A稳定性与抑菌活性初步研究[J]. 生物技术 2011(03)
- [13].多功能农药降解基因工程菌株m-CDS-1环境释放安全评价[J]. 微生物学报 2008(11)
- [14].鸡γ-干扰素基因重组质粒在工程菌株中的稳定性研究[J]. 微生物学通报 2008(07)
- [15].枯草芽孢杆菌工程菌株产普鲁兰酶发酵条件的优化[J]. 食品研究与开发 2012(07)
- [16].产琥珀酸工程菌株的发酵工艺条件优化[J]. 生物加工过程 2010(04)
- [17].荧光假单胞工程菌株对甜瓜细菌性果斑病的生物防治[J]. 中国植保导刊 2009(01)
- [18].导入nodD-lba串联基因的根瘤菌工程菌株的构建[J]. 生物技术通报 2013(08)
- [19].重组人胸腺素β16工程菌株的遗传稳定性研究[J]. 中国生化药物杂志 2009(01)
- [20].草本纤维提取专用复合酶工程菌株的构建[J]. 安徽农业科学 2009(09)
- [21].工业微生物解脂耶氏酵母及其应用研究[J]. 中国生物工程杂志 2020(09)
- [22].基因工程菌株nifDK基因敲除[J]. 黑龙江科学 2016(17)
- [23].导入额外拷贝dctA基因的根瘤菌工程菌株的构建[J]. 黑龙江大学自然科学学报 2012(03)
- [24].重组HBsAg在汉逊酵母中的分泌表达[J]. 中国生物制品学杂志 2009(02)
- [25].创制转Mad1基因球孢白僵菌工程菌株提高对玉米螟毒力[J]. 玉米科学 2019(05)
- [26].表达ST1-LTB-α-β融合蛋白基因工程菌株的构建及其免疫原性分析[J]. 生物工程学报 2008(08)
- [27].越南伯克霍尔德氏工程菌株B418-37的温室防病增产效果[J]. 山东农业科学 2008(07)
- [28].携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门菌工程菌株的构建及其活性[J]. 中国生物制品学杂志 2011(12)
- [29].高产酸性普鲁兰酶工程菌株种子强化工艺[J]. 精细化工 2017(11)
- [30].组成型表达chi基因的Bt工程菌株构建及其特性[J]. 微生物学通报 2014(05)