论文摘要
目的:本文以新生大鼠的海马神经细胞为研究对象,通过体外培养新生大鼠海马神经细胞,观察神经细胞生长状况,制备细胞癫痫模型,检测灵芝多糖对癫痫大鼠海马神经细胞的NF-κB变化的影响,进一步探讨癫痫的发病机理及灵芝多糖对癫痫海马神经细胞的作用机制。方法:将新生Wistar大鼠30只,断髓处死,取其海马进行原代培养,将培养第7天神经细胞分3组,分别为刺激组（加戊四氮）、对照组（加戊四氮和灵芝多糖）和空白组（以生理盐水代替）,选取时间点分别为0.5小时、1小时、6小时、12h小时,进行免疫细胞荧光化学反应。血清封闭后加抗NF-κB/p65亚基的一抗,磷酸盐缓冲液洗涤后,加异硫氰酸荧光素标记羊抗兔二抗,磷酸缓冲液洗涤后,用荧光显微镜观察,加碘化丙啶染液染色,最后利用荧光显微镜观察。其中用异硫氰酸荧光素标记NF-kB/p65亚基为绿色,碘化丙啶标记细胞的DNA为红色,指示细胞核的位置,应用免疫组织化学方法来检测各相关指标的变化。结果:体外培养新生大鼠的海马神经细胞成功,在培养的第7天,制备细胞癫痫模型,通过免疫细胞荧光化学反应证明戊四氮（PTZ）的作用使NF-κB核表达较对照组和空白组明显增多,提示海马神经细胞被活化,对照组较刺激组NF-κB核表达少。结论:以上实验结果提示:应用无血清基及阿糖胞苷这种培养方法,神经细胞生长良好,获得神经细胞的纯度达90%以上,为神经细胞相关的实验研究提供了良好的模型。同时也证明了NF-κB活化与癫痫发病机制有关,NF-κB在细胞核内的表达可作为神经细胞活化的标记物之一。灵芝多糖通过减少神经细胞内钙离子内流,从而间接抑制NF-κB进入细胞核,降低神经细胞的兴奋性,对癫痫发生有明显的拮抗作用,灵芝多糖作为一种治疗癫痫的辅助用药,在临床应用上有着非常广阔的前景。