TGFα对鼠视网膜Mǖller细胞谷氨酸转运体GLAST调控作用的研究

论文摘要

目的：研究转化生长因子α（Transforming growth factor alpha，TGFα）对鼠视网膜Müller细胞L-谷氨酸／L-天门冬氨酸转运体（L-glutamate／L-aspartate transporter，GLAST）的调控作用。方法：（1）采用组织块培养方法培养出生后7-10天（P7-10）小鼠视网膜Müller细胞。（2）实验分组：①TGFα干预组：将不同浓度TGFα（50ng／mol，75ng／mol，125ng／mol和150ng／mol）加入鼠视网膜Müller细胞中培养24小时；②对照组：Müller细胞中不加TGFα。（3）采用L-3H-谷氨酸摄取分析方法研究不同浓度TGFα对Müller细胞GLAST活性的影响。（4）采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法分析Müller细胞谷氨酸转运体GLASTmRNA表达的差异。（5）采用免疫细胞化学染色方法检测Müller细胞GLAST蛋白质表达的变化。结果：（1）不同浓度的TGFα均能使GLAST对L-3H-谷氨酸的摄取量增加，并且随着所加入TGFα浓度的增加，L-3H-谷氨酸的摄取量逐渐增加，当TGFα浓度为125ng／mol时，L-3H-谷氨酸的摄取量（cpm／mg／ml.pro∶8434.14±191.69）达到最大，是对照组摄取量（cpm／mg／ml.pro∶3166.81±47.50）的266％。（2）不同浓度的TGFα均能上调谷氨酸转运体GLASTmRNA的表达，并且随着TGFα浓度的增加，GLASTmRNA表达量增加，当TGFα浓度为125ng／mol时，GLASTmRNA表达量（0.85±0.13）最大，是对照组表达量（0.20±0.03）的4倍。（3）免疫细胞化学显示GLAST蛋白定位于视网膜Müller细胞胞浆和胞膜中。当TGFα浓度为125ng／mol时，干预组Müller细胞内GLAST蛋白的表达量明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGFα可通过上调GLASTmRNA和蛋白质的表达增加视网膜Müller细胞谷氨酸转运体GLAST的摄取活性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩写中英文对照
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果
• 3.1 视网膜Mailer细胞的培养和鉴定
• 3.2 不同浓度TGFα对视网膜Mailer细胞GLAST摄取活性的影响
• 3.3 不同浓度TGFα对视网膜Maller细胞GLASTmRNA表达的影响
• 3.4 TGFα对视网膜MOiler细胞GLAST蛋白质表达的影响
• 第四章 讨论
• 4.1 视网膜Mailer细胞
• 4.2 谷氨酸-谷氨酰胺循环与谷氨酸转运体
• 4.3 TGFα与谷氨酸转运体GLAST的调控
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果