论文摘要
禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类感染的疾病综合症，是危害目前养禽业最严重的疫病之一。已有研究表明H5N1-NS1蛋白可以作为诊断试剂来鉴别诊断免疫动物和自然感染动物，因而开展NS1蛋白的研究在禽流感防治方面具有较高的应用价值。本研究将人工合成的H5N1-NS1基因克隆进原核表达载体pET-28a（+）中，在大肠杆菌BL21中诱导表达，结果表明：大肠杆菌中表达的重组蛋白分子量为31 kD，与理论值相符，此外还有一条分子量为15 kD左右的特异性条带，推测与大肠杆菌密码子的偏爱性或表达产物降解有关；同时将H5N1-NS1基因克隆进杆状病毒转移载体pFastBacHT A中，通过Bac to Bac系统在Sf-9细胞中进行表达，表达的重组蛋白为33 kD，比预测的融合蛋白分子量30.5 kD略大，推测与表达产物的后加工有关。开展了基于DNA载体的RNAi抑制家蚕核多角体病毒（BmNPV）复制的研究。用人工合成“A3 promoter-Sence lef-1-TCAAGAG-Antisence lef-1-TTTTT-polyA signal”的结构元件，构建基于piggyBAC转座子的piggy-A3-lefl-neo转基因载体，转染piggy-A3-lefl-neo的BmN细胞，对BmNPV的增殖有明显的抑制效果。转染piggy-A3-lefl-neo的BmN细胞，经G418筛选两个月后，获得了阳性率为70％的转基因细胞，试验表明，该转化细胞对BmNPV有较好的抗性。