论文摘要
金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）是革兰染色阳性病原菌，能引起多种疾病。过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以侵袭多种非专职吞噬细胞，FnBP蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白。研究认为FnBP蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合，其中FnBPA与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白D结构域，以重复序列为单位，包括3个连续的完整的重复序列D1、D2、D3和一个截短的D4序列。由于空间位阻的关系，如果FnBP仅仅以重复序列为单位结合Fn分子，势必造成实际结合位点的减少和D4截短序列功能的冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测FnBPA D domain中的Fn结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对以上推测进行初步验证。根据文献报道，我们建立了细菌侵袭293细胞的实验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株04018作为实验用菌株。利用基因工程的方法，克隆了04018菌株的FnBPA蛋白D1区C端和D2区N端肽段的基因片段，在大肠杆菌中表达了GST与该肽（FnBPA-D1c/D2n）的融合蛋白。ELISA实验证实融合蛋白中的目的肽能够结合Fn，细菌侵袭细胞的实验证实融合蛋白的目的肽能够抑制金葡菌侵袭293细胞，蛋白的50％抑制剂量约为20μg/ml，相当于2.5μg/ml肽。通过本课题的研究，我们找到了金葡菌FnBPA蛋白中与纤连蛋白结合的新的位点，提示FnBPA蛋白的D结构域中或者具有更小的结合单位，或者存在更多的Fn结合位点，而不是预测的3-4个，并为抑制金葡菌侵袭细胞的应用研究提供了一定的基础。