人GIDRP88选择性剪接体的鉴定和功能研究

论文摘要

生长抑制和分化相关蛋白88（growth inhibition and differentiation related protein 88,GIDRP88）基因是在研究抗癌药物作用机理时,通过抑制消减杂交等技术获得的,初步认为该基因与肿瘤分化、生长和细胞周期相关。实验提示该基因存在不同的表达形式,可能是选择性剪接体,但是还需要进一步证实。 本学位论文报道了一个与细胞生长和分化相关的新基因GIDRP88A的克隆和研究结果,GIDRP88A是未知功能基因GIDRP88的选择性剪接形式。采用RT-PCR技术扩增GIDRP88,然后采用3’-RACE和5’-RACE方法,从乳腺癌细胞MDA-MB-231扩增到一个GIDRP88的新剪接型全长cDNA,其全长为2416bp,命名为GIDRP88A。生物信息学分析表明,GIDRP88A基因的选择性剪接位点都位于阅读框内,其全长cDNA比GIDRP88短约1kb,其中6号外显子缺失和5号外显子部分缺失,并在5号外显子缺失部位多出一个碱基A,导致终止密码子提前出现;GIDRP88A基因所编码的蛋白质与GIDRP88相比在C-端少了566个氨基酸残基,而GIDRP88基因所编码的蛋白质在C-端有两个与功能相关的重复区,因此,可能导致GIDRP88A基因的功能部分丧失,但是,仍然保留了与细胞生长和分化相关的结构域。此外,通过半定量RT-PCR技术,分析了GIDRP88A以及GIDRP88在正常和肿瘤组织中的表达水平,发现GIDRP88A在正常组织中高表达,在肿瘤组织中则呈低水平表达;而GIDRP88在正常和肿瘤组织中均呈高表达,提示二者之间在功能作用

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• 研究论文:人GIDRP88选择性剪接体的鉴定和功能研究
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• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果
• 3.1 GIDRP88A全长cDNA的克隆
• 3.2 GIDRP88A的ORF序列和染色体定位
• 3.3 GIDRP88A的基因结构分析
• 3.4 GIDRP88A的假定蛋白质序列分析和功能
• 3.5 GIDRP88A的组织表达分析
• 3.6 GST/GIDRP88A Ab融合蛋白的表达和抗体的制备
• 3.7 ORF的验证
• 3.8 GIDRP88A的亚细胞定位
• 3.9 原核表达的GIDRP88A对癌细胞的生长抑制
• 4 讨论
• 4.1 GIDRP88A全长cDONA的克隆
• 4.2 GIDRP88A的生物信息学分析
• 4.3 GIDRP88A的RT-PCR分析
• 4.4 GIDRP88A的阅读框的验证
• 4.5 GIDRP88A的亚细胞定位
• 4.6 GIDRP88A的原核表达产物对肿瘤细胞的抑制
• 小结
• 参考文献
• 文献综述:基因功能的研究方法
• 摘要
• 引言
• 1 生物信息学方法
• 1.1 针对核酸序列的预测方法
• 1.2 针对蛋白质的预测方法
• 2 基因转导技术
• 2.1 非病毒性表达载体
• 2.2 病毒表达载体
• 3 反义技术
• 3.1 反义寡核昔酸技术
• 3.2 反义RNA技术
• 3.3 核酶（Ribozyme）技术
• 4 基因敲除和基因打靶技术
• 4.1 基因敲除
• 4.2 基因打靶技术
• 5 人工染色体的转导
• 6 RNA干扰-基因功能研究的新途径
• 6.1 RNAi的发现
• 6.2 RNA干扰的作用机理
• 6.3 RNA干扰的作用特点
• 6.4 RNA干扰产生和导入方式
• 6.5 RNA干扰在基因功能研究上的应用
• 7 结束语
• 参考文献
• 声明
• 致谢