囊型肝包虫囊周肝组织与正常肝组织差异基因与差异蛋白的初步筛选及研究

论文摘要

目的（1）以绵羊自然发病肝包虫病例为研究对象,对该病例进行病理形态学观察及分期。为临床治疗和防治肝包虫病提供理论参考依据。（2）探讨囊型肝包虫囊周肝组织与正常肝组织的差异表达基因。（3）用蛋白质组学方法,建立人肝包虫囊周肝组织及正常肝组织的二维电泳图谱,筛选囊周肝组织与正常肝组织间差异表达蛋白,期望得到肝包虫发生发展相关蛋白。方法（1）采用石蜡包埋、切片、HE染色法对40例自然发病肝包虫绵羊进行镜检,分析结果。（2）取囊型肝包虫病人囊周肝组织与正常肝组织,应用抑制差减杂交技术构建正、反向差减杂交文库。经酶切鉴定存在表达差异的阳性克隆送去测序,测序结果Sequence Scanner V1.O去除酶切位点,再经Blaxtn和Genbank公共数据库进行比对。（3）收集术后新鲜肝包虫囊周肝组织和距包囊5厘米以上正常肝组织保存于液氮中备用。提取组织总蛋白,采用双向凝胶电泳（2-DE）技术得到各组凝胶图谱。结果和结论（1）根据绵羊肝包虫病理发生、发展及转归不同,可将肝包虫的病理改变过程分为两种类型。其一:肝窦扩张期、炎细胞渗出期、肉芽肿形成期、汇管区周围纤维组织增生期、囊肿形成期。其二:肝窦扩张期、炎细胞渗出期、肉芽肿形成期、坏死期、脓肿灶形成期,脓肿液被吸收、消散、形成钙化灶。并依其疾病的发展程度,将肝窦扩张期、炎细胞渗出期归为轻度,肉芽肿期、汇管区周围纤维组织增生期归为中度,囊肿形成期归为重度。（2）共筛选出阳性克隆306个,其中正向差减文库阳性克隆292个,反向差减文库阳性克隆14个。送去的测序的127条序列中,有92条测序成功,除去重复序列,共获的71条差异序列。（3）建立了囊周肝组织和正常肝组织双向凝胶电泳图谱,多数蛋白质点集中在pH4-7之间。摸索建立了肝组织蛋白样品的制备方法,并初步优化了蛋白质组学研究中的实验条件。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 第一部分：囊型肝包虫的病理组织学观察及分期
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 3.1 苏木素- 伊红染色镜下病理组织学
• 3.2 附图
• 4 讨论
• 参考文献
• 第二部分：应用抑制差减杂交技术构建囊周肝组织与正常肝组织的cDNA 文库
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三部分：应用蛋白二维电泳进行囊周肝组织与正常肝组织差异蛋白组研究
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 结论与展望
• 致谢
• 作者简介
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