论文题目: 异源四倍体柑橘体细胞杂种有性后代遗传与变异研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 果树学
作者: 伊华林
导师: 邓秀新
关键词: 异源四倍体,柑橘体细胞杂种,有性后代,遗传分析,随机分配
文献来源: 华中农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 新品种的选育和推广对柑橘产业的发展具有举足轻重的作用。在柑橘类果树中,由于存在多胚性干扰、重要栽培品种雌/雄性器官败育、童期长等障碍,一方面杂交育种亲本来源受到了限制,另一方面使杂交育种这一实现遗传物质重组最有效的育种方式育种效率大大降低。原生质体融合技术有效克服了这些障碍,迄今通过这一技术已得到250多例柑橘体细胞杂种。不仅使近缘属中的有利性状如抗寒、抗热、抗虫和抗病等能够转移到柑橘属重要栽培种或品种中;而且还获得了雌/雄性器官败育和花期不遇等种质间的体细胞杂种,极大地丰富了柑橘属基因库。 三倍体果树具有无籽、果大等特点,是生产者与育种者均向往的类型。四倍体与二倍体杂交是获得三倍体类型的一种主要方式。柑橘体细胞杂种为异源四倍体,与同源四倍体不同,它们具有两个亲本的遗传物质,与二倍体杂交,其后代变异可能更为广泛,能获得具有三亲遗传物质组合的后代,这为选育性状更为优良的三倍体品种提供了优异亲本。在已获得的250多例柑橘体细胞杂种中,有近一半是优良接穗品种间的融合,其主要目的就是为通过倍性杂交获得无籽的三倍体柑橘类型提供有价值的亲本材料。 自然进化形成的物种对环境、气候等具有高度的适应性,在人工杂交或者天然杂交中,其遗传信息都能随机地传递给后代。柑橘体细胞杂种是经过人为措施将两个具有不同遗传背景的种质遗传信息结合在一起,不同亲本的遗传物质传递给后代的机会是否均等,有什么规律,至今还未见相关报道。本研究的目的就是利用体细胞杂种[哈姆林甜橙(Citrus sinensis Osbeck)+粗柠檬(C. Jambhiri Luss)]为父本与二倍体有籽单胚品种宜本杂四号(C. reticulata Blanco×C. ichangensis Swingle)杂交,获得一个有性群体,从后代探寻体细胞杂种双亲性状的传递规律。主要研究结果如下: 1、通过流式细胞仪分析,获得的92株有性后代植株中有13株二倍体,79株三倍体,三倍体比率为85.9%,二倍体比率为14.1%,与染色体计数方法观测的结果基本一致。 2、有性后代植株叶长、叶宽、叶面积平均值低于双亲,叶厚与双亲接近,而气孔长、宽与密度介于双亲之间。有性后代植株叶长、叶宽、叶面积、叶厚及气孔长、
论文目录:
摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
1．1 课题研究的目的与意义
1．2 国内外研究进展
1．2．1 植物遗传分析方法研究
1．2．1．1 形态学标记的研究进展
1．2．1．2 细胞学、化学与孢粉学等方面的研究
1．2．1．3 蛋白质、同工酶及等位酶研究
1．2．1．4 DNA分子标记
1．2．2 柑橘体细胞杂种的研究与应用
1．2．2．1 柑橘体细胞杂种的生物学性状及遗传稳定性研究
1．2．2．2 柑橘体细胞杂种的应用
1．2．2．2．1 作为杂交亲本培育三倍体
1．2．2．2．2 作为砧木应用
1．3 研究的内容与目的
2 材料与方法
2．1 材料
2．1．1 RAPD及倍性分析材料
2．1．2 形态学分析材料
2．1．3 胞质遗传和 SSR分析材料
2．1．4 有性后代有丝分裂行为观察材料
2．1．5 分子标记分析主要试剂、引物、探针及来源
2．2 方法
2．2．1 叶片植物学性状调查
2．2．2 叶片气孔长、宽及密度的测定
2．2．3 倍性鉴定
2．2．4 有丝分裂行为观察
2．2．5 花粉活性观测、花粉粒数统计及花、果性状观测
2．2．5．1 花粉活性观测
2．2．5．1．1 花粉染色活性观测
2．2．5．1．2 花粉萌芽率统计
2．2．5．2 花粉粒数目统计
2．2．5．3 花、果性状观测
2．2．6 总 DNA提取
2．2．7 RAPD分析
2．2．8 电泳及检测
2．2．9 数据统计与聚类分析
2．2．10 SSR分析
2．2．11 胞质基因组 RFLP分析
2．2．11．1 DNA酶切与电泳分离
2．2．11．2 Southern转移
2．2．11．3 Southern杂交
2．2．11．4 X光片曝光、冲洗
3 结果与分析
3．1 有性后代植株倍性鉴定
3．2 有性后代植株叶片形态遗传变异
3．3 有性后代体细胞有丝分裂行为观察
3．4 有性后代花粉量、花粉育性及花器官构成观察
3．5 PAPD引物筛选及杂种鉴定
3．5．1 引物筛选
3．5．2 杂种鉴定
3．6 杂交亲本特异标记传递规律及与倍性的关系
3．6．1 杂交亲本特异标记总体传递规律
3．6．2 父本融合双亲不同特异标记传递规律
3．6．3 倍性与亲本标记传递关系
3．7 聚类分析
3．8 有性后代胞质遗传行为
4 讨论
4．1 体细胞杂种在柑桔育种尤其是三倍体育种中的潜力
4．2 柑桔体细胞杂种有性后代倍性分离原因探讨
4．3 RAPD技术与遗传分析
参考文献
图版和说明
致谢
附录Ⅰ RAPD分析初筛引物编号及序列表
附录Ⅱ 有性后代及其亲本叶片形态数据表
附录Ⅲ “IB_1×HR”杂交组合有性后代及亲本间的遗传距离矩阵表
附录Ⅳ 博士研究生阶段发表论文与相关成果
发布时间: 2005-12-05
参考文献
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