论文摘要
胰岛素受体底物PH域相互作用蛋白（Pleckstrin homology domain-interacting protein. PHIP）是能促进GLUT4的移位,介导细胞的凋亡、增殖,在胰岛素诱导的信号转导途径中扮演重要的角色。而胰岛素受体底物1 （insulin receptor substrate 1, IRS1）和TBC区域家族成员1 （TBC （Tre-2/Bub2/Cdc16） domain family, member 1, TBC1D1）是胰岛素信号途径的关键基因,可能在PHIP实现对胰岛素信号途径调控的作用中起作用。本试验以四川白鹅肝脏组织为材料,扩增鹅PHIP、IRS1、TBC1D1基因mRNA部分序列,采用RACE技术扩增PHIP mRNA全序列,并运用实时定量PCR技术检测不同浓度葡萄糖、胰岛素处理鹅原代肝细胞对PHIP、IRS1、TBC1D1基因表达的影响。研究结果如下：（1）克隆得到了四川白鹅IRS1和TBC1D1二个基因的部分编码区序列（Coding domain sequence, CDS）,它们的大小分别为530bp和300bp。利用MEGA 5软件构建部分脊椎动物IRS1、TBC1D1基因的分子进化树发现,IRS1、TBC1D1基因的序列与火鸡、原鸡、斑胸草雀聚为一类。（2）利用RACE技术扩增并获得PHIP基因3条mRNA剪接体全序列,分别长5,525bp、5,080bp和4,677bp,命名为PHIP-a、PHIP-b和PHIP-c。通过生物信息学分析3条鹅PHIP mRNA剪接体剪接方式为选择性加尾。（3）鹅PHIP mRNA3种剪切体均编码相同蛋白质,由1295个氨基酸组成,蛋白相对分子量为147002.48Da,理论等电点pI=8.01。用NetPhos2.0软件预测发现有90个磷酸化位点,其中Ser位点60个,Thr位点18个,Tyr位点12个。用SMART在线软件分析发现有8个WD40区域,一个BROWO区域,5个Low complexity区域。（4）在低浓度的葡萄糖组（5 mmol/L）, PHIP、IRS1、TBC1D1三个基因的表达有所上调,在高浓度的葡萄糖组（30 mmol/L）, PHIP、IRS1、TBC1D1三个基因的表达显著增加（P<0.05）；而低浓度的胰岛素诱导PHIP、IRS1、TBC1D1表达,当胰岛素浓度达到200 nmol/L时,PHIP、IRS1、TBC1D1的表达显著下降（P<0.05）。（5）葡萄糖和胰岛素的协同作用发现,低浓度（50 nmol/L）的胰岛素和5 mmol/L和30 mmol/L协同葡萄糖都能促进PHIP、IRS1、TBC1DI个基因的表达,而高浓度胰岛素（100 nmol/L）在低糖和高糖协同下,都能显著抑制3个基因的表达。